細(xì)胞類(lèi)型:源于人多能干細(xì)胞的神經(jīng)祖細(xì)胞(NPCs)用于凍存在神經(jīng)誘導(dǎo)后的任何時(shí)間通過(guò)STEMdiffTM神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)生成的NPCs解凍復(fù)蘇的NPCs具有可重復(fù)性的高回收率,,表型正常,且保持了可擴(kuò)增及分化為神經(jīng)元,、星形膠質(zhì)細(xì)胞和其它神經(jīng)細(xì)胞類(lèi)型的潛能產(chǎn)品信息產(chǎn)品名稱(chēng)規(guī)格貨號(hào)mFreSRTM10x5mL小管包裝0585450mL05855FreSRTM-S50mL05859STEMdiffTM神經(jīng)祖細(xì)胞凍存液100mL05838MesenCultTM-ACF凍存液50mL05490用于凍存在神經(jīng)誘導(dǎo)后的任何時(shí)間通過(guò)STEMdiffTM神經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)生成的NPCs凍存盒凍存細(xì)胞原理是什么?江蘇活細(xì)胞凍存液配制
細(xì)胞冷凍的原理:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力,。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。上海快速細(xì)胞凍存液性能指標(biāo)產(chǎn)品特色:即用型細(xì)胞凍存液.
細(xì)胞凍存是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,,減少細(xì)胞代謝,,以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,,起到了細(xì)胞保種的作用,。中文名細(xì)胞凍存儲(chǔ)存方式將細(xì)胞放在低溫環(huán)境細(xì)胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過(guò)程中,在培養(yǎng)器具,、培養(yǎng)液及各種準(zhǔn)備工作方面都需大量的耗費(fèi),,而且細(xì)胞一旦離開(kāi)***開(kāi)始原代培養(yǎng),它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化,。因此及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存十分必要,。
3、步驟:(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期,。(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基,、血清,,逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,,置于室溫下待用,。(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率,。(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,,并晃動(dòng)試管,,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO***濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ml,,混合均勻,,分裝于已標(biāo)示完全之冷凍保存管中,1~2ml/vial,,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè),。嚴(yán)密封口后,,注明細(xì)胞名稱(chēng)、代數(shù),、日期,。然后進(jìn)行凍存。細(xì)胞的凍存密度一般為?
一,、細(xì)胞冷凍保存1.材料:生長(zhǎng)良好之培養(yǎng)細(xì)胞,、新鮮培養(yǎng)基、DMSO(SigmaD-2650),、無(wú)菌塑料冷凍保存管(Nalgene5000-0020),、0.4%(w/v)trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球計(jì)數(shù)盤(pán)與蓋玻片,、等速降溫機(jī)(KRYO10SeriesII)2,、冷凍保存方法:(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí),,以防止胞內(nèi)冰晶過(guò)大,,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中,,惟存活率稍微降低一些,。(2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-80℃以下)-120℃,再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存,。采取逐級(jí)降溫保存:4℃放置20min,-20℃放置30min,,-70℃?過(guò)夜,,***置于液氮罐中長(zhǎng)期存儲(chǔ)。上海即用型細(xì)胞凍存液
無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液加入適量的細(xì)胞凍存液于離心管中,,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至1~5×106 /ml;江蘇活細(xì)胞凍存液配制
根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)皿的大小加入適量細(xì)胞培養(yǎng)基后進(jìn)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng),。保存條件:4℃保存,有效期一年,。若長(zhǎng)不用可凍存于-20℃,,有效期三年。產(chǎn)品質(zhì)量:無(wú)血清細(xì)胞凍存液經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的內(nèi),,滲透壓,,pH檢測(cè),并經(jīng)過(guò)0.1um濾膜過(guò)濾,,確保產(chǎn)品不含有細(xì)菌,,支原體等污染。注意事項(xiàng):1.請(qǐng)選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行凍存,,由于DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的損傷,,凍存細(xì)胞分裝后應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱,,減少在室溫存放時(shí)間,。如遇特殊情況,,可先短暫放置于4℃并盡快轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱。江蘇活細(xì)胞凍存液配制
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