細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細胞活力,。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法,，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。理論上儲存時間是無限的,。細胞凍存液的原理及配制方法?江蘇細胞凍存液比例

細胞復(fù)蘇佩戴眼鏡和手套,，從液氮中取出凍存的細胞管。迅速放入38℃水浴中,，并不時搖動,，在1分鐘內(nèi)使其完全融化，然后在無菌條件下取出細胞,。1200rpm/min離心5-10min,，棄去上清，加入適量培養(yǎng)液混勻后接種于培養(yǎng)瓶中,，次日更換一次培養(yǎng)液,。細胞凍存和復(fù)蘇操作步驟：細胞凍存和復(fù)蘇采取“慢凍快融”的原則，慢速冷凍可使細胞內(nèi)的水份滲出細胞外,，減少細胞內(nèi)形成冰晶的機會,，快融以保證細胞外結(jié)晶快速融化，避免慢速融化水份滲入細胞內(nèi),，再次形成胞內(nèi)冰晶造成對細胞的損傷,。上海單核細胞凍存液生產(chǎn)廠家細胞凍存液可快速冷凍，可直接置于-80℃冰箱冷凍,，長期保存,，不需要程序性降溫。

細胞凍存的操作步驟是什么配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗,。去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來,；離心1000rpm,，5min；去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml,；將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml,；在凍存管上標(biāo)明細胞的名稱,，凍存時間及操作者；凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當(dāng)溫度達-25℃以下時,，可增至-5℃～-10℃/min,；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,，起到了細胞保種的作用。除此之外,，還可以利用細胞凍存的形式來購買,、寄贈、交換和運送某些細胞,。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細胞內(nèi)水分透出,，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種,、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。

細胞凍存液是如何保護細胞的,？如何凍存和復(fù)蘇細胞,？科幻電影中將凍存若干年的生命體重新解凍復(fù)活的情節(jié)在生命科學(xué)研究過程中每***都在上演。為了將每一種有生命的細胞較好的保存其原有的細胞特性或者長久的保存種質(zhì)資源,，實驗人員往往將細胞用特殊配置的細胞凍存液保存于-196℃的液氮,，使得細胞暫時脫離生長狀態(tài)，等到實驗需要的時候再從液氮中取出復(fù)蘇應(yīng)用,。在這一看似神奇的生命存儲過程中,，我們不禁要問細胞凍存液是如何保護每一個細胞生命的？無血清快速細胞凍存液，減少各類霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細胞安全.江蘇懸浮細胞凍存液作用

細胞凍存液避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷,。江蘇細胞凍存液比例

細胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；2.取對數(shù)生長期的細胞,，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗,。3.去除PBS,，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；4.離心1000rpm,，5min,；5.去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細胞均勻,，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的**終密度為5106/ml～1107/ml,；6.將細胞分裝入凍存管中,，每管1～1.5ml；7.在凍存管上標(biāo)明細胞的名稱,，凍存時間及操作者,；8.凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min；當(dāng)溫度達-25℃以下時,，可增至-5℃～-10℃/min,；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi),。江蘇細胞凍存液比例

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