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電轉染試劑配制

來源: 發(fā)布時間:2023-02-18

確定希望輸送的運載物(如DNA、RNA或蛋白質)根據(jù)不同實驗類型,,我們可能需要將不同的運載物輸送到細胞內(nèi)部,,包括**常見的DNA,用于基因編輯的siRNA,,能夠更快表達蛋白的mRNA,,CRISPR-Cas9甚至是體內(nèi)轉染。正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉染產(chǎn)品的第一步,。2希望轉染的細胞類型轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,,連續(xù)細胞系和原代細胞。連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理,。但由于此類細胞經(jīng)歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,,它們在培養(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內(nèi)狀態(tài)。各種轉染試劑成分分析.電轉染試劑配制

圖2.采用LipofectamineRNAiMAX轉染試劑轉染A549細胞時,,實現(xiàn)了比較好的基因***效果和比較低的細胞毒性,。試驗采用的LipofectamineRNAiMAX試劑劑量范圍為0.1μL-1.0μL之間,在維持優(yōu)良的細胞活力的同時,,實現(xiàn)了p53基因表達水平的有效敲低.功能多樣簡便的實驗方案,,易于針對***的細胞系進行優(yōu)化Invivofectamine?3.0Reagent突破性的體內(nèi)轉染試劑Invivofectamine3.0試劑是一種突破性的體內(nèi)RNAi輸送試劑,可大幅改善實驗性能,,使用微克級的siRNA即可達到高達85%的敲低效果,。上海動物細胞轉染試劑對照轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,連續(xù)細胞系和原代細胞.

轉染48小時后,,使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進行成像(左側四幅圖),,A:LipoD293;B:293fectin,;C:Xfect和D:Fugene6.帶有6xHis標記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術實現(xiàn)分離,。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進行Coomassie亮藍染色(右上圖E),道1為LipoD293293,、道2為標準蛋白分子,、道3為Xfect、道4為293fectin和道5為Fugene6,。這四種轉染試劑產(chǎn)生蛋白質的效率被進一步定量(見右下圖F),。產(chǎn)生慢***的比較通過LipoD293?試劑(升級版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個cDNAs共轉染進293T細胞。一個GFP載體,,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來測定慢***的滴度,。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細胞,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,,1微升(上圖)和10微升(下圖),。

對HepG2細胞轉染效率的比較右圖:使用以上轉染試劑將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)商的提供的轉染步驟轉染到HepG2細胞(在膠原預處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng))。在轉染48小時之后,,用流式細胞儀檢測GFP陽性細胞(%)和熒光強度,。左圖:血清和***存在的條件下能提高LipoD293試劑(升級版)對在HepG2細胞的轉染效率。通過三種不同的條件下轉染HepG2細胞(生長在膠原處理的培養(yǎng)皿上)---無血清和***,,10%血清和***的存在,,轉染5小時后換液和不換液。轉染試劑--總有一款你想要的.

用LipoFectMax?轉染Hela細胞,,左圖轉染GFPcDNA,,右圖共轉染GFPCDNA和GFP靶向siRNA,。轉染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。4適用于神經(jīng)細胞的轉染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經(jīng)元細胞進行轉染綠色熒光白蛋白(GFP),,轉染24小時后觀察轉染效果,,LipoFectMax?轉染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍。LipoFectMax?轉染試劑轉染試劑操作流程細胞毒性低圖2.LipoFectMax?,,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細胞進行轉染操作,,通過計算轉染后的細胞存活率比較細胞毒性。每孔培養(yǎng)體積均為100μL,,細胞數(shù)目在105左右,。Opti-MEM轉染試劑

一般會同時設置對照,對RNAi結果進行比較,。RNAi的成功取決于正確導入合適量的siRNA,,達到比較大預期反應。電轉染試劑配制

用LipoD293?體外DNA轉染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉染pEGFP-C1質粒到HEK293細胞中,。轉染24小時后,,細胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側)和熒光成像圖(右側)。對懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質效率的比較30毫升的293F細胞分別使用LipoD293?試劑,、293fectin,、Xfect和Fugene6等轉染試劑按照生產(chǎn)商的標準轉染步驟將pEGFP-6xHis質粒導入細胞表達,,用量為LipoD293?試劑,,20微克,所有其他三種轉染試劑均使用30微克質粒DNA,。電轉染試劑配制

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