（一）細(xì)胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細(xì)胞凍存液,，4℃預(yù)冷（新鮮配制的凍存液會(huì)產(chǎn)生大量的熱）,；取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，用細(xì)胞消化酶將單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來,；懸浮細(xì)胞則直接將細(xì)胞收集到離心管中,；離心1200rpm，6min,；去除上清液,，逐漸加入適量預(yù)冷的細(xì)胞凍存液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,，計(jì)數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞終濃度為510e6/ml~110e7/ml；將細(xì)胞分裝入凍存管中,，每管1~1.5ml,；在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱、凍存時(shí)間及操作人員姓名,；凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min,；到達(dá)-80℃時(shí)，則可迅速放入液氮中,。細(xì)胞凍存為什么要慢凍?上海無血清細(xì)胞凍存液配方

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無限的。上海無血清細(xì)胞凍存液配方無血清快速細(xì)胞凍存液,，是一種新型開發(fā)的快速凍存細(xì)胞的保護(hù)液.

凍存/解凍標(biāo)準(zhǔn)流程TBD598,、TBD698可以按照下列步驟操作,，TBD798需要先使用自體血漿配制然后凍存。建議凍存細(xì)胞密度為1106-107個(gè)/ml一.凍存1.在室溫以300xg離心5分鐘,。2.輕輕吸走上清液,，注意不要擾動(dòng)細(xì)胞團(tuán)。3.用血清學(xué)吸管以1mL的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,，打散細(xì)胞團(tuán)時(shí),。4.用2mL的血清學(xué)吸管將1mL的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的凍存管中。5.用以下方法凍存細(xì)胞:推薦使用緩速降溫方法,，每分鐘降低1度,，隨后可以在-196C液氮長(zhǎng)期保存。不推薦在-80C長(zhǎng)期保存,。逐步降溫法：-20C保存2個(gè)小時(shí),，然后-80C中保存2個(gè)小時(shí)，隨后可以在-196C液氮中長(zhǎng)期保存,。

細(xì)胞冷存液***頭輕柔吹打混勻,Z成細(xì)胞懸液,。4.將離心管中的細(xì)胞懸液分裝與細(xì)胞凍存管中，每管1mL或1.5mL,。5.將分裝好的細(xì)胞直接凍存于-80℃冰箱中,，可穩(wěn)定凍存數(shù)年。6.如若長(zhǎng)期保存,，可在次日轉(zhuǎn)移至液氮中,。操作步驟:細(xì)胞復(fù)蘇：1.從-80℃冰箱或液氮中取出凍存細(xì)胞，立即放入37℃水浴槽中快速解凍,。2.待凍存管中細(xì)胞懸液完全融化后,，立即1000rmp離心5分鐘，完全除去上清,。3.加入1mL細(xì)胞培養(yǎng)基于凍存管中,，***頭輕柔吹打懸浮細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移細(xì)胞于細(xì)胞培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)瓶中,。減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。

3,、步驟：（1）冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基，使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期,。（2）配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管,，加入培養(yǎng)基、血清,，逐滴加入二甲基亞砜（DMSO）至20%濃度,，即制成雙倍的凍存液,，置于室溫下待用。（3）離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,，取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。（4）取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,，并晃動(dòng)試管，制成細(xì)胞凍存懸液（DMSO***濃度為5～10％）,，使細(xì)胞濃度為1～5×106cells/ml,，混合均勻，分裝于已標(biāo)示完全之冷凍保存管中,，1～2ml/vial,，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。嚴(yán)密封口后,，注明細(xì)胞名稱,、代數(shù)、日期,。然后進(jìn)行凍存,。通用型細(xì)胞凍存液配方是多少？無血清細(xì)胞凍存液怎么樣

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紅細(xì)胞裂解液產(chǎn)品說明：紅細(xì)胞裂解液,，為10X紅細(xì)胞裂解液,，經(jīng)過優(yōu)化配方，用于從人或鼠等的血液或標(biāo)本中裂解并去除無細(xì)胞核紅細(xì)胞的溶液,。此溶液中主要有效成分為氯化銨,。使在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過無菌過濾,，處理過的血液或細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng),、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。注意事項(xiàng)：對(duì)于微量或少量的血液樣品,，可以在一步中不進(jìn)行離心棄上清的操作,，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液，并在冰上裂解4-5分鐘,。對(duì)于鼠的血液,，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血,，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至10分鐘,，但通常不宜超過15分鐘，并且裂解過程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。后續(xù)步驟相同,。上海無血清細(xì)胞凍存液配方

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