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上海原代細胞轉染試劑推薦

來源: 發(fā)布時間:2023-03-10

用LipoD293?體外DNA轉染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉染pEGFP-C1質粒到HEK293細胞中,。轉染24小時后,,細胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側)和熒光成像圖(右側),。對懸浮HEK293F產生蛋白質效率的比較/30毫升的293F細胞分別使用LipoD293?試劑,、293fectin,、Xfect和Fugene6等轉染試劑按照生產商的標準轉染步驟將pEGFP-6xHis質粒導入細胞表達,,用量為LipoD293?試劑,,20微克,,所有其他三種轉染試劑均使用30微克質粒DNA,。從而造成了細胞群內的基因型和表型接近一致的情形,。上海原代細胞轉染試劑推薦

轉染48小時后,使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進行成像(左側四幅圖),,A:LipoD293,;B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene6.帶有6xHis標記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術實現分離,。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進行Coomassie亮藍染色(右上圖E),,道1為LipoD293293、道2為標準蛋白分子,、道3為Xfect,、道4為293fectin和道5為Fugene6。這四種轉染試劑產生蛋白質的效率被進一步定量(見右下圖F),。產生慢***的比較通過LipoD293?試劑(升級版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個cDNAs共轉染進293T細胞,。一個GFP載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來測定慢***的滴度,。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細胞,,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1微升(上圖)和10微升(下圖),。動物細胞轉染試劑推薦CycloFect轉染試劑,你了解多少?

在難轉染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)轉染效率的比較圖片由芝加哥大學肺和重癥護理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用LipoD293?試劑(左圖)和Lipofecatmine2000(L2K,右圖)分別將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產制造商的轉染操作步轉染至該細胞,。轉染24小時后,,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,,以此來評價轉染效率。對難轉染細胞LNCap細胞轉染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所(RoswellCancerInstitute)的LynGao博士友情提供

確定希望輸送的運載物(如DNA、RNA或蛋白質)根據不同實驗類型,,我們可能需要將不同的運載物輸送到細胞內部,,包括**常見的DNA,用于基因編輯的siRNA,,能夠更快表達蛋白的mRNA,,CRISPR-Cas9甚至是體內轉染。正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉染產品的第一步,。2希望轉染的細胞類型轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,,連續(xù)細胞系和原代細胞。連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,,通常要比原代或有限細胞更易處理,。但由于此類細胞經歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,它們在培養(yǎng)過程中的表現可能無法必然地反映體內狀態(tài),。包括**常見的DNA,,用于基因編輯的siRNA,能夠更快表達蛋白的mRNA,,CRISPR-Cas9甚至是體內轉染,。

圖2.采用LipofectamineRNAiMAX轉染試劑轉染A549細胞時,實現了比較好的基因***效果和比較低的細胞毒性,。試驗采用的LipofectamineRNAiMAX試劑劑量范圍為0.1μL-1.0μL之間,,在維持優(yōu)良的細胞活力的同時,實現了p53基因表達水平的有效敲低.功能多樣簡便的實驗方案,,易于針對***的細胞系進行優(yōu)化Invivofectamine?3.0Reagent突破性的體內轉染試劑Invivofectamine3.0試劑是一種突破性的體內RNAi輸送試劑,,可大幅改善實驗性能,使用微克級的siRNA即可達到高達85%的敲低效果,。pei轉染試劑說明書主要內容是什么?DNA轉染試劑價格

轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,,連續(xù)細胞系和原代細胞。上海原代細胞轉染試劑推薦

原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖,。因此,,它們的形態(tài)學和生理特征和體內狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細胞系,,它們通常更難培養(yǎng)和轉染,。在經過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系,。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),,且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據支配地位,,從而造成了細胞群內的基因型和表型接近一致的情形,。相對來說,,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩(wěn)定轉染的克隆傳代,。上海原代細胞轉染試劑推薦

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