用LipoD293?體外DNA轉(zhuǎn)染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒到HEK293細(xì)胞中,。轉(zhuǎn)染24小時后,細(xì)胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側(cè))和熒光成像圖(右側(cè)),。對懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/30毫升的293F細(xì)胞分別使用LipoD293?試劑,、293fectin、Xfect和Fugene6等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將pEGFP-6xHis質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞表達(dá),,用量為LipoD293?試劑,,20微克,所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用30微克質(zhì)粒DNA,。質(zhì)粒細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟是什么?上海非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑配制
原代細(xì)胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖,。因此,它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似,。但相對于連續(xù)細(xì)胞系,,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后,,原代培養(yǎng)物變成了一種細(xì)胞系,。源自于原代培養(yǎng)物的細(xì)胞系具有有限的壽命(即它們是有限細(xì)胞系),且隨著傳代的進(jìn)行,,具有比較高的生長能力的細(xì)胞逐漸占據(jù)支配地位,,從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,,這一類細(xì)胞要比原代細(xì)胞使用起來更為方便,,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代...上海體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室中**常規(guī)的研究手段,,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細(xì)胞內(nèi),。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,,物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用***等微生物作為基因?qū)胼d體,,以慢***,、腺***和腺相關(guān)***等**常見,其侵染效率可以達(dá)到90%以上,,但常因安全性等問題,,很多實(shí)驗(yàn)室對其敬而遠(yuǎn)之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射,、電穿孔和基因***,,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,且一分錢一分貨,,性能好的價格也都很性感電轉(zhuǎn)化化學(xué)轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學(xué)研究中**常用的轉(zhuǎn)染方法,,主要包括兩類:陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物,。其基本原理是利用陽離子的化學(xué)分子與帶有負(fù)電荷的核酸通過正負(fù)電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。
羅氏X-TremeGENE便是新一代轉(zhuǎn)染試劑的佼佼者,,升級版的多組分混合試劑,,兼具極高轉(zhuǎn)染效率和極低細(xì)胞毒性,在超過350株真核細(xì)胞株中獲得了高效轉(zhuǎn)染的驗(yàn)證,,尤其針對難轉(zhuǎn)染細(xì)胞株亦有出色表現(xiàn),。圖1.兩種試劑對CHO-K1細(xì)胞轉(zhuǎn)染帶GFP標(biāo)記的質(zhì)粒,A和C是轉(zhuǎn)染后熒光顯微圖,,B和D是明場顯微圖.與競爭產(chǎn)品比較,,X-tremeGENEHP表現(xiàn)出更優(yōu)的轉(zhuǎn)染效率更低的細(xì)胞毒性圖2.不同試劑在含血清的培養(yǎng)基中對四種很難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株進(jìn)行轉(zhuǎn)染,X-tremeGENEHP試劑遠(yuǎn)優(yōu)于其他試劑超過350種細(xì)胞株的高效轉(zhuǎn)染驗(yàn)證還有一個好消息X-TremeGENE轉(zhuǎn)染試劑正在進(jìn)行8折促銷哦快去搶購吧~連續(xù)細(xì)胞系具有無限增殖的潛能,,通常要比原代或有限細(xì)胞更易處理.
用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,,左圖轉(zhuǎn)染GFPcDNA,右圖共轉(zhuǎn)染GFPCDNA和GFP靶向siRNA,。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默,。4適用于神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白(GFP),轉(zhuǎn)染24小時后觀察轉(zhuǎn)染效果,,LipoFectMax?轉(zhuǎn)染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍,。LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,,通過計(jì)算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性,。轉(zhuǎn)染產(chǎn)品知多少:轉(zhuǎn)染試劑選擇工具.上海非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑配制
riboFECT CP轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)用案例,可轉(zhuǎn)染各種細(xì)胞,靠譜!上海非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑配制
圖5.Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的siRNA在單次靜脈注射后可在肝臟中引起劑量反應(yīng)的敲低現(xiàn)象。Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的劑量進(jìn)行注射,。隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平(Biophen顯色檢測),。持續(xù)敲低能力在單次注射后可觀察到更長的敲低時間圖6.使用三種不同濃度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究劑量效應(yīng)。siRNA分子與Invivofectamine3.0試劑形成復(fù)合物后分別以1,、0.5,、及0.25mg/kg的劑量進(jìn)行注射。在第2,、5,、9、16,、23及30日收集血清,,并使用顯色法對血清進(jìn)行分析以確定FVII蛋白的敲低效果。低毒性上海非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑配制
上海儒安生物科技,,2016-09-20正式啟動,,成立了細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,ecl發(fā)光液,cck8細(xì)胞增殖,,內(nèi)參抗體等幾大市場布局,,應(yīng)對行業(yè)變化,順應(yīng)市場趨勢發(fā)展,,在創(chuàng)新中尋求突破,,進(jìn)而提升上海儒安生物的市場競爭力,把握市場機(jī)遇,,推動醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)的進(jìn)步,。旗下上海儒安生物在醫(yī)藥健康行業(yè)擁有一定的地位,品牌價值持續(xù)增長,,有望成為行業(yè)中的佼佼者,。同時,企業(yè)針對用戶,,在細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,,ecl發(fā)光液,cck8細(xì)胞增殖,,內(nèi)參抗體等幾大領(lǐng)域,,提供更多、更豐富的醫(yī)藥健康產(chǎn)品,,進(jìn)一步為全國更多單位和企業(yè)提供更具針對性的醫(yī)藥健康服務(wù),。值得一提的是,上海儒安生物科技致力于為用戶帶去更為定向,、專業(yè)的醫(yī)藥健康一體化解決方案,,在有效降低用戶成本的同時,更能憑借科學(xué)的技術(shù)讓用戶極大限度地挖掘上海儒安生物的應(yīng)用潛能,。