確定希望輸送的運載物(如DNA,、RNA或蛋白質(zhì))根據(jù)不同實驗類型,,我們可能需要將不同的運載物輸送到細胞內(nèi)部,包括**常見的DNA,,用于基因編輯的siRNA,,能夠更快表達蛋白的mRNA,CRISPR-Cas9甚至是體內(nèi)轉(zhuǎn)染,。正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉(zhuǎn)染產(chǎn)品的第一步,。2希望轉(zhuǎn)染的細胞類型轉(zhuǎn)染的細胞類型可簡單分為兩大類,,連續(xù)細胞系和原代細胞。連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,,通常要比原代或有限細胞更易處理,。但由于此類細胞經(jīng)歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,它們在培養(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內(nèi)狀態(tài),。RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是先進,、高效的siRNA輸送解決方案。細胞轉(zhuǎn)染試劑盒
LNCap細胞的培養(yǎng)和傳代嚴格由ATCC建議的操作步驟進行,,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,,共1.0微克)共轉(zhuǎn)染(6孔板中每孔的量),并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產(chǎn)制造商的科學實驗步驟進行轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染24小時后,,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉(zhuǎn)染效率,。在血清和***的存在下,,HepG2和SaoS-2細胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達到95%的細胞融合。轉(zhuǎn)染48小時后,,分別通過Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測效率,。國產(chǎn)轉(zhuǎn)染試劑分裝將EntransterTM-R4000稀釋液和agomir稀釋液充分混合.
圖3.用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine3.0試劑及RNAi復合物非常容易獲得:只需簡單地混合,并進行孵育(30min),、稀釋,、及注射即可。高效,、靶向敲低在實驗靶標中可觀察到高達85%的敲低效果圖4.使用Invivofectamine3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低,。Invivofectamine3.0試劑與靶向FactorVII(FVII)或PPIBmRNA的siRNA組成的復合物,以每千克小鼠體重1mg(mg/kg)的注射量進行注射,,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達85%的敲低(使用TaqMan分析對敲低進行評估),。
圖7.對注射了Invivofectamine3.0試劑的小鼠樣品進行血液化學分析。將Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的復合物分別以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未處理[U]的劑量注射入小鼠體內(nèi),。在注射后2,、24及48小時收集血液樣品,并通過臨床化學檢測方法對數(shù)個生物標志物(Antech)進行評估,。結(jié)果表明在使用Invivofectamine3.0試劑進行轉(zhuǎn)染的每個個體間所檢測的生物標志物的水平與未注射該試劑的個體相比并沒有***差異,。除了以上兩種于siRNA的轉(zhuǎn)染試劑,還有通用型轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000,,Lipofectamine?3000和Neon?轉(zhuǎn)染系統(tǒng)也可以用于siRNA轉(zhuǎn)染.0試劑及RNAi復合物非常容易獲得:只需簡單地混合,,并進行孵育(30min)、稀釋、及注射即可,。
在選擇轉(zhuǎn)染方法時,需考慮您希望輸送的運載物(DNA,、RNA或蛋白質(zhì))以及您希望轉(zhuǎn)染的細胞類型,。您可通過下表選擇各類陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑和Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。我們提供了各種DNA,、siRNA,、寡核苷酸和RNA輸送選擇,讓您可以對自己的結(jié)果更加自信.***的輸送效果—可轉(zhuǎn)染多種類型的細胞無毒性作用—您之所以能看到結(jié)果,,是因為核酸存在,,而不是因為試劑需要的優(yōu)化工作更少—針對大多數(shù)細胞類型提供了快速、簡便的實驗方案連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,,通常要比原代或有限細胞更易處理,。但由于此類細胞經(jīng)歷過基因改變而變得具有無限增殖能力,它們在培養(yǎng)過程中的表現(xiàn)可能無法必然地反映體內(nèi)狀態(tài),。用了這個轉(zhuǎn)染試劑,慢***再也不用怕轉(zhuǎn)不進去了!國產(chǎn)轉(zhuǎn)染試劑分裝
用于siRNA的轉(zhuǎn)染試劑,,還有通用型轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?.細胞轉(zhuǎn)染試劑盒
產(chǎn)生慢***的比較通過LipoD293?試劑(升級版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個cDNAs共轉(zhuǎn)染進293T細胞。一個GFP載體,,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來測定慢***的滴度,。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細胞,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,,1微升(上圖)和10微升(下圖),。5天后,細胞通過流式細胞儀檢測,。右上角的數(shù)字表明轉(zhuǎn)導的細胞的百分比來測定慢***的滴度,。由LipoD293?andLTX產(chǎn)生的慢***的滴度被量化,分為是8x10^6和3x10^6tu/ml,。細胞轉(zhuǎn)染試劑盒
上海儒安生物科技有限公司辦公設施齊全,,辦公環(huán)境優(yōu)越,為員工打造良好的辦公環(huán)境,。在上海儒安生物科技近多年發(fā)展歷史,,公司旗下現(xiàn)有品牌上海儒安生物等。我公司擁有強大的技術實力,,多年來一直專注于從事生物技術,、物聯(lián)網(wǎng)技術、網(wǎng)絡技術領域內(nèi)的技術開發(fā),、技術咨詢,、技術轉(zhuǎn)讓、技術服務,,軟件開發(fā),,電子商務(不得從事增值電信,、金融業(yè)務),化工產(chǎn)品及原料(除危險化學品,、監(jiān)控化學品,、民用物品、易制毒化學品),、實驗窒設備的銷售,。的發(fā)展和創(chuàng)新,打造高指標產(chǎn)品和服務,。上海儒安生物科技始終以質(zhì)量為發(fā)展,,把顧客的滿意作為公司發(fā)展的動力,致力于為顧客帶來***的細胞轉(zhuǎn)染試劑,,ecl發(fā)光液,,cck8細胞增殖,內(nèi)參抗體,。