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即用型細(xì)胞凍存液使用方法

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-03-21

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,,可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種,起到了細(xì)胞保種的作用,。除此之外,,還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞,。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),可使溶液冰點(diǎn)降低,加之在緩慢凍結(jié)條件下,,細(xì)胞內(nèi)水分透出,,減少了冰晶形成,從而避免細(xì)胞損傷,。采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活,。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1到-2℃/min,,當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速,,到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。無(wú)血清快速細(xì)胞凍存液加入適量的細(xì)胞凍存液于離心管中,,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至1~5×106 /ml;即用型細(xì)胞凍存液使用方法

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的原則是:慢凍速融,,這樣更加有利于保持細(xì)胞的活力。凍存細(xì)胞不加任何保護(hù)劑,,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,,從而使細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機(jī)械損傷,引起細(xì)胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,,PH,,電解質(zhì)等的改變,進(jìn)而促使細(xì)胞死亡,。在過(guò)去的幾十年中,,科研工作者將培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例配制成凍存液,,并配合手工使細(xì)胞從4℃,,-20℃,-80℃到液氮中逐步轉(zhuǎn)移使其達(dá)到“慢凍”的效果,。但這種自制的凍存液儲(chǔ)存時(shí)間一般比較短,,不能滿足時(shí)間跨度大的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的需求。且這樣人力和時(shí)間成本大,,人手操作的誤差和血清制品的批間差也給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)了不穩(wěn)定性,。低溫細(xì)胞凍存液怎么樣細(xì)胞凍存液比例是多少?

細(xì)胞復(fù)蘇佩戴眼鏡和手套,從液氮中取出凍存的細(xì)胞管,。迅速放入38℃水浴中,,并不時(shí)搖動(dòng),在1分鐘內(nèi)使其完全融化,,然后在無(wú)菌條件下取出細(xì)胞,。1200rpm/min離心5-10min,棄去上清,,加入適量培養(yǎng)液混勻后接種于培養(yǎng)瓶中,,次日更換一次培養(yǎng)液。細(xì)胞凍存和復(fù)蘇操作步驟:細(xì)胞凍存和復(fù)蘇采取“慢凍快融”的原則,慢速冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水份滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)形成冰晶的機(jī)會(huì),,快融以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,避免慢速融化水份滲入細(xì)胞內(nèi),,再次形成胞內(nèi)冰晶造成對(duì)細(xì)胞的損傷,。

3、步驟:(1)冷凍前24-48小時(shí)更換半量或全量培養(yǎng)基,,使細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期,。(2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基,、血清,,逐滴加入二甲基亞砜(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,,置于室溫下待用,。(3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率,。(4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,,并晃動(dòng)試管,,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSO***濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ml,,混合均勻,,分裝于已標(biāo)示完全之冷凍保存管中,1~2ml/vial,,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè),。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱,、代數(shù),、日期。然后進(jìn)行凍存,。細(xì)胞凍存液可以放多久?

細(xì)胞冷凍的原理:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。BI細(xì)胞凍存液是什么成分?即用型細(xì)胞凍存液使用方法

細(xì)胞凍存液配制主要成分.即用型細(xì)胞凍存液使用方法

無(wú)血清細(xì)胞凍存液介紹1.是一種通用型的細(xì)胞凍存液,,可用于凍存人和各種動(dòng)物細(xì)胞株;完全凍存液配方,,即開即用,,方便快捷;非程序降溫,,-80℃低溫冰箱凍存長(zhǎng)達(dá)5年,;特別配方(主要成分為DMSO和氨基酸)具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力;不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,,能減少各類***,、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細(xì)胞安全,;可孔板(細(xì)胞培養(yǎng)板)凍存,可用于雜交瘤細(xì)胞的凍存液.拳頭產(chǎn)品“無(wú)血清細(xì)胞凍存液”半價(jià)銷售(注:本次價(jià)格調(diào)整有效期限至結(jié)束)無(wú)血清細(xì)胞凍存液對(duì)比含血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì)Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液存儲(chǔ)條件儲(chǔ)存于4℃或-20℃,。質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,,為期三年。3個(gè)月以上沒(méi)有使用凍存液計(jì)劃時(shí),,盡可能-20℃冷凍保存,。為避免重復(fù)凍融過(guò)程可能導(dǎo)致的凍存液品質(zhì)下降和性能降低,推薦將產(chǎn)品分裝成小管后,,再存放于-20℃冰箱凍存,。即用型細(xì)胞凍存液使用方法

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