細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介：X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,，溶于80%乙醇中，經(jīng)0.2μm濾膜過濾,，然后封裝于玻璃小瓶中，適用于細(xì)胞分析的多種實驗,。優(yōu)勢：1.具有細(xì)胞毒性極低,、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高，生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡便,、節(jié)省時間,，只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡單稀釋，再與質(zhì)粒DNA共同孵育,，即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可),。3.對于常用細(xì)胞無需進(jìn)行費時費力的優(yōu)化工作。無論有無血清,、***存在均可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,。上海細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染是將外源核酸導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程，是細(xì)胞和分子生物學(xué)研究的重要工具,，也是大部分的生物和分子生物領(lǐng)域的科研黨們繞不開的話題,。然而常常聽到的抱怨是"轉(zhuǎn)染效率太低""轉(zhuǎn)染完細(xì)胞全漂了""轉(zhuǎn)染后忘記給細(xì)胞換液了"，真所謂辛辛苦苦實驗N多回,，一夜回到解放前……眾所周知,，影響轉(zhuǎn)染成功的因素非常多，包括細(xì)胞質(zhì)量,、核酸質(zhì)量,、微生物污染,、轉(zhuǎn)染試劑等,。各種細(xì)胞使用的轉(zhuǎn)染條件都可能不同，現(xiàn)實中也并沒有一種放之四海而皆準(zhǔn)的方案,。上海蛋白轉(zhuǎn)染試劑正確的了解您希望輸送的運載物是選擇可靠轉(zhuǎn)染產(chǎn)品的第一步,。

超級好用的siRNA和miRNA轉(zhuǎn)染試劑——HiPerFect高效沉默低脫靶：HiPerFect是小RNA轉(zhuǎn)染試劑，這種非脂質(zhì)體的脂質(zhì)分子可以在siRNA低至100pM濃度的條件下轉(zhuǎn)染（推薦濃度是1nM-5nM）,。保持高效基因沉默的同時降低脫靶效應(yīng),，正是這一產(chǎn)品的精髓所在。除了siRNA,，HiPerFect還能夠用于miRNA模擬物和***劑的轉(zhuǎn)染,，滿足miRNA功能分析的需要。操作簡單,，方便快速：HiperFect轉(zhuǎn)染試劑的方便程度也是***的,，甚至***之內(nèi)可以完成再次接種、轉(zhuǎn)染到檢測結(jié)果,！這對于高通量反應(yīng)簡直是求之不得的福音：轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞按比例接種到24孔培養(yǎng)皿中,，培養(yǎng)基可以是含有***和血清的，在37度培養(yǎng)箱中保溫,。

在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞（原代大鼠動脈平滑肌細(xì)胞）轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由芝加哥大學(xué)肺和重癥護(hù)理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動脈平滑肌原代細(xì)胞并用使用LipoD293?試劑（左圖）和Lipofecatmine2000（L2K,右圖）分別將GFP的cDNA（pEGFP-N3）按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細(xì)胞,。轉(zhuǎn)染24小時后，用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光，以此來評價轉(zhuǎn)染效率,。對難轉(zhuǎn)染細(xì)胞LNCap細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所（RoswellCancerInstitute）的LynGao博士友情提供轉(zhuǎn)染產(chǎn)品知多少——siRNA轉(zhuǎn)染試劑.

轉(zhuǎn)染48小時后,，使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進(jìn)行成像（左側(cè)四幅圖），A：LipoD293,；B：293fectin,；C：Xfect和D：Fugene6.帶有6xHis標(biāo)記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術(shù)實現(xiàn)分離。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進(jìn)行Coomassie亮藍(lán)染色（右上圖E）,，道1為LipoD293293,、道2為標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子、道3為Xfect,、道4為293fectin和道5為Fugene6,。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進(jìn)一步定量（見右下圖F）。產(chǎn)生慢***的比較通過LipoD293?試劑（升級版）和LipofectamineLTX（LTX）試劑將三個cDNAs共轉(zhuǎn)染進(jìn)293T細(xì)胞,。一個GFP載體,，pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來測定慢***的滴度。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細(xì)胞,，其次是分別添加不同量的慢定都上清液,，1微升（上圖）和10微升（下圖）。將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細(xì)胞懸液中,，前后移動培養(yǎng)皿,，混合均勻；上海轉(zhuǎn)染試劑對照

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用LipoD293?體外DNA轉(zhuǎn)染試劑（Ver.II）（上圖）和受歡迎的品牌產(chǎn)品Invitrogen公司的293fectin?（下圖）轉(zhuǎn)染pEGFP-C1質(zhì)粒到HEK293細(xì)胞中,。轉(zhuǎn)染24小時后,，細(xì)胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖（左側(cè)）和熒光成像圖（右側(cè)）。對懸浮HEK293F產(chǎn)生蛋白質(zhì)效率的比較/30毫升的293F細(xì)胞分別使用LipoD293?試劑,、293fectin,、Xfect和Fugene6等轉(zhuǎn)染試劑按照生產(chǎn)商的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染步驟將pEGFP-6xHis質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞表達(dá)，用量為LipoD293?試劑,，20微克,，所有其他三種轉(zhuǎn)染試劑均使用30微克質(zhì)粒DNA。上海細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

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