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羅氏轉(zhuǎn)染試劑推薦

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-04-26

.在多種不同類型細(xì)胞中基因敲除效率超過(guò)90%。高靈活應(yīng)用,,同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實(shí)驗(yàn),。細(xì)胞毒性低,結(jié)果相關(guān)性好,,確保所觀察到的細(xì)胞效應(yīng)是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過(guò)程本身介導(dǎo),。兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)染前后均無(wú)需換液(如無(wú)血清培養(yǎng)基),。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細(xì)胞系的HPRT基因沉默實(shí)驗(yàn),。根據(jù)各試劑說(shuō)明書建議的操作流程,或標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法,,將100nMHPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細(xì)胞,通過(guò)LightCycler®h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評(píng)估基因沉默效率,。結(jié)果顯示用羅氏這款試劑在四種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。隨后分離血清并檢測(cè)FVII蛋白的水平(Biophen 顯色檢測(cè)),。羅氏轉(zhuǎn)染試劑推薦

胞因素用低代數(shù)的細(xì)胞293T細(xì)胞非常重要?。‘?dāng)然也要保證細(xì)胞狀態(tài)特別好,,沒(méi)有細(xì)微污染,,鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細(xì)胞才可以產(chǎn)生較高滴度的***哦,!載體系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)中**常見的慢***載體系統(tǒng)有三質(zhì)粒系統(tǒng),、四質(zhì)粒系統(tǒng),當(dāng)然使用三質(zhì)粒系統(tǒng)的小伙伴居多,,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng),!載體構(gòu)建和質(zhì)粒抽提純化我們要注意是否構(gòu)建時(shí)導(dǎo)致質(zhì)粒載體重組或某個(gè)部件缺失,或污染別的質(zhì)粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時(shí)做陰性對(duì)照的習(xí)慣:建議目的基因載體和陰性對(duì)照GFP載體是同一批,,且建議每次包裝都如此操作,,要保證目的基因的表達(dá)載體構(gòu)建純化良好,質(zhì)粒間比例得當(dāng),,并且對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行酶切驗(yàn)證。羅氏轉(zhuǎn)染試劑推薦正確的了解您希望輸送的運(yùn)載物是選擇可靠轉(zhuǎn)染產(chǎn)品的第一步,。

對(duì)HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較右圖:使用以上轉(zhuǎn)染試劑將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟轉(zhuǎn)染到HepG2細(xì)胞(在膠原預(yù)處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)),。在轉(zhuǎn)染48小時(shí)之后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP陽(yáng)性細(xì)胞(%)和熒光強(qiáng)度,。左圖:血清和***存在的條件下能提高LipoD293試劑(升級(jí)版)對(duì)在HepG2細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,。通過(guò)三種不同的條件下轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞(生長(zhǎng)在膠原處理的培養(yǎng)皿上)---無(wú)血清和***,10%血清和***的存在,,轉(zhuǎn)染5小時(shí)后換液和不換液,。

用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,左圖轉(zhuǎn)染GFPcDNA,,右圖共轉(zhuǎn)染GFPCDNA和GFP靶向siRNA,。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。4適用于神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine®2000分別對(duì)小鼠神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白(GFP),,轉(zhuǎn)染24小時(shí)后觀察轉(zhuǎn)染效果,,LipoFectMax?轉(zhuǎn)染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍。LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax?,,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,,通過(guò)計(jì)算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性.細(xì)胞轉(zhuǎn)染必備——高效低毒轉(zhuǎn)染試劑.

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