讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻,，酶標(biāo)儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度,。

***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項

CCK8法檢測細(xì)胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng)，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響,，應(yīng)事先去除,。如果實驗條件中存在還原物質(zhì)，需單獨(dú)測定還原物質(zhì)的空白吸光度,。如果還原物質(zhì)的吸光度很小,，可以忽略不計；但如果吸光度很大,，則需要去除培養(yǎng)基,，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測,。 這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.浙江cck8視頻

在做一些***毒性試驗時,，比如做鐵死亡途徑時，我們加入一個***叫C1,，這個時候就需要提前換液,，其實我們試過，還是會有一些影響,。所以這時我們用中性紅檢測,。我們實驗室，通常會用20%的硫酸銅溶液放到細(xì)胞孵箱下層,，預(yù)防******,。理應(yīng)說，硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子,，是不會揮發(fā)的,。但是每次只要是新?lián)Q的硫酸銅溶液再做CCK-8，結(jié)果總是不好,，我也不知道是什么原因,。之前在我們實驗室有發(fā)生過這樣的事情，這種有深有淺的才是該有的結(jié)果,。我想說的是在有能力選擇范圍內(nèi),，盡量選擇好一點的試劑,，免得浪費(fèi)時間。浙江cck8視頻***篩選：在測定一個***的毒性和安全有效濃度時,，經(jīng)常會用到CCK-8。

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實驗誤差,，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右,。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收,，但不影響測定,，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要,，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照,。另外，血清不影響測定,。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時,，多加了這個***劑的濃度，

細(xì)胞增殖實驗就是對細(xì)胞生長的測定,，常用的方法有MTT,、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細(xì)胞生長的影響,，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以,，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項,。MTT實驗操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,，設(shè)置對照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）,、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2,、在對照組和實驗組中,，每孔加入細(xì)胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時請問合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?

五、實驗注意事項：·若暫時不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化,。·如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基）,，去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基,，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。·當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時,，貼壁細(xì)胞的**小接種量至少為1,000個/孔(100μl培養(yǎng)基),。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μl培養(yǎng)基),。使用方便,，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑.浙江cck8視頻

在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）.浙江cck8視頻

CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實驗時研究生二年級的時候,，當(dāng)時用的***個盒子是Sigma的，當(dāng)時的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich,，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma,。那個盒子給了我莫大的鼓勵，因為在那之前做分子克隆一直都不是很順利,。這個盒子是我的碩士老板從美國帶回來的,，品質(zhì)有保證，***的結(jié)果也是很好的,。后面在做CCK-8的實驗時,，我們在有選擇的情況下都會買sigma，下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖,。其實也不貴,，只是到貨時間太慢。

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