細胞冷存液

***頭輕柔吹打混勻,Z成細胞懸液,。4.將離心管中的細胞懸液分裝與細胞凍存管中,，每管1mL或1.5mL。5.將分裝好的細胞直接凍存于-80℃冰箱中，可穩(wěn)定凍存數(shù)年,。6.如若長期保存，可在次日轉(zhuǎn)移至液氮中,。

操作步驟:

細胞復蘇：1.從-80℃冰箱或液氮中取出凍存細胞,，立即放入37℃水浴槽中快速解凍,。

2.待凍存管中細胞懸液完全融化后,，立即1000 rmp離心5分鐘，完全除去上清,。

3.加入1mL細胞培養(yǎng)基于凍存管中,，***頭輕柔吹打懸浮細胞，并轉(zhuǎn)移細胞于細胞培養(yǎng)皿或者培養(yǎng)瓶中,。 無血清快速細胞凍存液加入適量的細胞凍存液于離心管中,，調(diào)節(jié)細胞濃度至1~5×106 /ml;武漢配制好的細胞凍存液加不加血清

凍存細胞類型：臍血及臍帶組織,、外周血、間充質(zhì)干細胞,、多能干細胞、組織樣本等

① 用于減輕冷凍和解凍復蘇期間由溫度引起的分子應激反應

② 分別以2%,、5%或10%USP級的二甲基亞砜（DMSO）預先配制即用型細胞凍存液

凍存細胞類型：臍血及臍帶組織、外周血和骨髓

① BloodStor®55-5以55%（重量/體積）的DMSO（USP）級,、5%（重量/體積）的葡萄糖-40（USP）級和注射液（WFI）級別的水預先配制

② BloodStor®100含有**（重量/體積）的DMSO（USP級）

南京bi 細胞凍存液的區(qū)別細胞凍存一定要沒過液氮嗎?

解凍

解凍后,，應該立即鋪板在預先包被好的培養(yǎng)皿中。

開始之前,，提前準備好以下材料：試管,，恢復至室溫的培養(yǎng)基,，預先包被的培養(yǎng)板,，確保整個解凍復蘇程序可以在**短的時間內(nèi)完成,。

注意：不要在37°C水浴中加熱培養(yǎng)基。

1. 在37°C水浴中快速解凍,，持續(xù)溫和的在水中晃動凍存管,，直到剩余少量細胞還處于結冰狀態(tài),。

2. 水浴中取出凍存管,，用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌,。

3. 用2 mL的血清移液管把細胞懸液轉(zhuǎn)移到一個15 mL的錐形試管。

注意：用2 mL的血清移液管代替1 mL的***頭可以減少細胞聚集體的分解,。

冷凍保護劑甘油或二甲基亞砜（DMSO）分子量小,、溶解度大,、細胞膜通透性好,，可以使冰點下降，提高細胞膜對水的通透性,，且對細胞無明顯毒性,。DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點,、延緩凍存過程，同時提高細胞膜通透性,，提高細胞內(nèi)離子濃度,，減少細胞內(nèi)冰晶的形成,，從而減少細胞損傷達到保護細胞的目的,。

諾為生物所提供的STEMCELL Technologies cGMP級別、無血清的細胞凍存液可使長期儲存的細胞保持高存活率,，可應用于臨床細胞和特殊珍貴細胞的凍存,。 細胞凍存液配方是什么?

3,、步驟：? （1）冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期,。? （2）配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管,，加入培養(yǎng)基,、血清,，逐滴加入二甲基亞砜（DMSO）至20%濃度,，即制成雙倍的凍存液,，置于室溫下待用。? （3）離心收集培養(yǎng)之細胞,，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞,，取少量細胞懸浮液(約0.1ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率,。? （4）取與細胞懸液等量的凍存液,，緩慢逐滴加入細胞懸液,，并晃動試管,，制成細胞凍存懸液（DMSO***濃度為5～10％），使細胞濃度為1～5×106 cells/ml,，混合均勻，分裝于已標示完全之冷凍保存管中,，1～2ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測,。嚴密封口后,，注明細胞名稱,、代數(shù),、日期,。然后進行凍存。細胞凍存液要不要含血清?廣州懸浮細胞凍存液如何保存

細胞凍存液取對數(shù)成長期的體細胞,，除去舊細胞培養(yǎng)液,，用PBS清理.武漢配制好的細胞凍存液加不加血清

注意冷凍保護劑之品質(zhì)。DMSO應為試劑級等級,，無菌且無色(以0.22micron?FGLP?Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品,，如Sigma?D-2650),，以5～10ml小體積分裝,，4℃避光保存,，勿作多次解凍,。Glycerol亦應為試劑級等級,，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,，因長期儲存后對細胞會有毒性,。本方法中先制備雙倍凍存液,，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷,。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應高滲，可降低細胞受損,。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化,，可換用10%甘油凍存,。?武漢配制好的細胞凍存液加不加血清

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