冷凍細胞活化? 1,、冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對細胞造成傷害,，導(dǎo)致細胞之死亡,。? 2、細胞活化后,，約需數(shù)日,，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì)),。? 3,、材料? 37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基,、無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶,、液氮或干冰容器?4、步驟：? （1）操作人員應(yīng)戴防護面罩及手套,，防止冷凍管可能爆裂之傷害,。? （2）自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊,，由于熱脹冷縮過程,，此時蓋子易松掉。?（3）將新鮮培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫,，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi),。?“細胞凍存液的細胞存活率和活力高,，批次性差異小.成都加完細胞凍存液4 保存

（一）細胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細胞凍存液，4℃預(yù)冷（新鮮配制的凍存液會產(chǎn)生大量的熱）,；取對數(shù)生長期的細胞,，用細胞消化酶將單層生長的細胞消化下來；懸浮細胞則直接將細胞收集到離心管中,；離心1200rpm,，6min；去除上清液,，逐漸加入適量預(yù)冷的細胞凍存液,，用吸管輕輕吹打使細胞均勻,，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中的細胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml,；將細胞分裝入凍存管中,，每管1~1.5ml；在凍存管上標明細胞的名稱,、凍存時間及操作人員姓名,；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；到達-80℃時,，則可迅速放入液氮中,。北京快速細胞凍存液顏色細胞凍存液避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。

細胞凍存的操作步驟是什么配制含10%DMSO或甘油,、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液,；取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液,，用PBS清洗,。去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來,；離心1000rpm,，5min；去除胰蛋白酶,，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù),，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的**終密度為5×106/ml～1×107/ml,；將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5ml,；在凍存管上標明細胞的名稱,，凍存時間及操作者；凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/min,；當溫度達-25℃以下時,，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時,，則可迅速浸入液氮中,。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi)。

細胞凍存是細胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,，起到了細胞保種的作用。除此之外,，還可以利用細胞凍存的形式來購買,、寄贈、交換和運送某些細胞,。 細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO),，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下,，細胞內(nèi)水分透出,，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷,。 采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細胞存活,。標準冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當溫度低于-25℃時可加速,，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃),。無血清快速細胞凍存液加入適量的細胞凍存液于離心管中，調(diào)節(jié)細胞濃度至1~5×106 /ml;

胞培養(yǎng)凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞培養(yǎng)的低溫保存完全培養(yǎng)基,。              

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細胞凍存一定要沒過液氮嗎?成都加完細胞凍存液4 保存

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