用途：

***篩選、

細(xì)胞增殖測(cè)定、

細(xì)胞毒性測(cè)定,、

**藥敏試驗(yàn)等,。

所需設(shè)備及儀器：

10ul，100-200ul及多通道移液器

酶標(biāo)儀（帶有450nm濾光片）

96孔培養(yǎng)板

二氧化碳培養(yǎng)箱

培養(yǎng)0.5-4小時(shí):細(xì)胞種類(lèi)不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續(xù)培養(yǎng),，以確認(rèn)比較好條件。特別是血液細(xì)胞形成的Formazan很少,，需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間（5-6小時(shí)）,。

測(cè)定450nm吸光度：建議采用雙波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)波長(zhǎng)450-490nm,，參比波長(zhǎng)600-650nm,。 靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好.上海cck8細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

實(shí)驗(yàn)原理：CellCountingKit-8（簡(jiǎn)稱(chēng)CCK-8）試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析,。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。江蘇dmso在cck8的溶劑對(duì)照酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾,；

CCK-8的原理

所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。為什么是粗略的呢，因?yàn)檫@里沒(méi)有考慮到細(xì)胞代謝水平的高低，有些細(xì)胞在***處理后,，可能活細(xì)胞數(shù)不變,，但是代謝率低了以后，細(xì)胞呼吸減弱,，NAD+產(chǎn)生減少,，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少，所以此時(shí)怎么算呢（此時(shí)我就比較懷戀中性紅了）,？當(dāng)然也有解決的辦法,，下期給大家介紹。因此可利用這個(gè)原理進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,，在吸光度為450時(shí)檢測(cè)讀數(shù),。用途及常用的公

特點(diǎn)不同1、CellCountingKit-8：靈敏度高,，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好；操作簡(jiǎn)便,，省時(shí)省力,；水溶性，不需要換液,，尤其適合于懸浮細(xì)胞；無(wú)需放射性同位素和有機(jī)溶劑,，對(duì)細(xì)胞毒性低,；適合于高通量***篩選。2,、MTT法：特點(diǎn)是靈敏度高,、經(jīng)濟(jì)。三,、應(yīng)用不同1,、CellCountingKit-8：主要用途為***篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定,、細(xì)胞毒性測(cè)定,、**藥敏試驗(yàn)。2,、MTT法：***用于一些生物活性因子的活性檢測(cè),、大規(guī)模的抗*****篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及**放射敏感性測(cè)定等,。接種時(shí)注意細(xì)胞懸液一定要混勻,，以避免細(xì)胞沉淀下來(lái)，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不一致。

CCK-8（CellCountingKit-8）細(xì)胞活性和增殖檢測(cè)是醫(yī)學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),，其原理是該試劑中含有WST-8,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。以下是CCK-8檢測(cè)的具體步驟：細(xì)胞活性檢測(cè)1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ml/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃,，5%CO2的條件下),。在CCK-8試劑盒中，**主要的化學(xué)藥品是WST-8.上海cck8 懸浮細(xì)胞

CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)原理.上海cck8細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

在做每個(gè)東西之前,，都要搞清楚這個(gè)東西是什么,。CCK-8的英文全稱(chēng)是Cell Counting Kit-8，也就是進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)盒子,。那它的用途也就大致可以猜到,，和細(xì)胞增殖相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都可以。CCK-8的原理在CCK-8試劑盒中,，**主要的化學(xué)藥品是WST-8,，化學(xué)名為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽。它的**基團(tuán)和MTT是一樣的,，是MTT的升級(jí)版本,。在電子耦合試劑（也就是細(xì)胞是活的，有呼吸,，有能量代謝）存在的情況下,，可被NAD+氧化還原成為水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物(Formazan)?；罴?xì)胞越多,，產(chǎn)生的Formazan就越多，顏色也會(huì)越深（如圖1,，來(lái)自于Sigma）,。上海cck8細(xì)胞生長(zhǎng)曲線

上海儒安生物科技有限公司位于真南路4268號(hào)2幢J1718室，擁有一支專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),。專(zhuān)業(yè)的團(tuán)隊(duì)大多數(shù)員工都有多年工作經(jīng)驗(yàn),，熟悉行業(yè)專(zhuān)業(yè)知識(shí)技能，致力于發(fā)展上海儒安生物的品牌,。公司以用心服務(wù)為重點(diǎn)價(jià)值,，希望通過(guò)我們的專(zhuān)業(yè)水平和不懈努力，將從事生物技術(shù),、物聯(lián)網(wǎng)技術(shù),、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開(kāi)發(fā),、技術(shù)咨詢(xún)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓,、技術(shù)服務(wù),，軟件開(kāi)發(fā)，電子商務(wù)(不得從事增值電信,、金融業(yè)務(wù)),，化工產(chǎn)品及原料(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品,、民用物品,、易制毒化學(xué)品)、實(shí)驗(yàn)窒設(shè)備的銷(xiāo)售,。等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底,。自公司成立以來(lái)，一直秉承“以質(zhì)量求生存,，以信譽(yù)求發(fā)展”的經(jīng)營(yíng)理念,，始終堅(jiān)持以客戶(hù)的需求和滿(mǎn)意為重點(diǎn)，為客戶(hù)提供良好的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑,，ecl發(fā)光液,，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體,，從而使公司不斷發(fā)展壯大,。