一直都像個(gè)新手，從未老道過(guò)。所有新手的迷茫與無(wú)奈我**能體會(huì),?？吹綀@子里有一些同學(xué)在問(wèn)有關(guān)CCK8試驗(yàn)的事情，當(dāng)初我也和他們一樣,，像個(gè)被蜘蛛絲纏住頭的迷茫蒼蠅一頭扎進(jìn)園子里,，期待能找到些解決謎團(tuán)的只言片語(yǔ),。希望我寫(xiě)的這些非專業(yè)文字能夠幫助那些在實(shí)驗(yàn)室里沒(méi)有前行者指點(diǎn)迷津的筒子們。當(dāng)然仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智,，我寫(xiě)的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，就供參考,。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的,，道路是曲折的，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的,，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰。CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.湖北cck8 波長(zhǎng)

CKK-8原理

CellCountingKit,，CCK-8試劑含有WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）,，是近年新開(kāi)發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測(cè)，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）,。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,，用酶聯(lián)免疫分析儀測(cè)定其光吸收值可間接反映活細(xì)胞數(shù)量，在一定細(xì)胞數(shù)量范圍內(nèi)甲臜形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。

湖北cck8法**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見(jiàn)過(guò)做**的團(tuán)隊(duì)，買CCK-8都是一整箱,，一整箱的買。

用途：

***篩選,、

細(xì)胞增殖測(cè)定,、

細(xì)胞毒性測(cè)定,、

**藥敏試驗(yàn)等,。

所需設(shè)備及儀器：

10ul,，100-200ul及多通道移液器

酶標(biāo)儀（帶有450nm濾光片）

96孔培養(yǎng)板

二氧化碳培養(yǎng)箱

培養(yǎng)0.5-4小時(shí):細(xì)胞種類不同,，形成的Formazan的量也不一樣,。如果顯色不夠的話，可以繼續(xù)培養(yǎng),，以確認(rèn)比較好條件,。特別是血液細(xì)胞形成的Formazan很少,，需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間（5-6小時(shí)）,。

測(cè)定450nm吸光度：建議采用雙波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)波長(zhǎng)450-490nm,，參比波長(zhǎng)600-650nm,。

氧化還原試劑對(duì)CCK8測(cè)定的影響：CCK8是一個(gè)氧化還原反應(yīng)實(shí)驗(yàn),，在整個(gè)操作當(dāng)中,，如果有氧化還原試劑都會(huì)影響**終的結(jié)果。當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)影響CCK8的測(cè)定,，增加OD值,。在有氧化性物質(zhì)存在時(shí)會(huì)***測(cè)定反應(yīng)的發(fā)生,，減少OD值,。在高中化學(xué)我們就知道金屬是氧化還原反應(yīng)中的重要參與者,。各個(gè)公司都會(huì)告訴你：“終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%,、15%、90%的顯色反應(yīng),，使靈敏度降低,。如果終濃度是10mM的話,，將會(huì)*****,。”我**開(kāi)始看到這句話時(shí)很懵,，因?yàn)椴恢涝诓僮髦性鯓訒?huì)遇到這種情況。下面就分享我能想到或者在操作中真實(shí)遇到的,。cck8試劑盒價(jià)格是多少?

1,、種板數(shù)：這個(gè)要查文獻(xiàn)，看你所用細(xì)胞別人有無(wú)做過(guò),，把范圍大致找出,。記住還要參考說(shuō)明書(shū)，這個(gè)很重要,。然后稀釋一系列濃度種板,。首先你要觀察多長(zhǎng)時(shí)間細(xì)胞可貼壁完全,，一般貼壁生長(zhǎng)24小時(shí),。然后還有在你的實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi),，不同細(xì)胞數(shù)下孔內(nèi)生長(zhǎng)情況。比如我擬定考察4天的時(shí)間,，那么在4天內(nèi)，細(xì)胞是剛好鋪滿還是堆積生長(zhǎng),？因?yàn)槊繅K板都會(huì)設(shè)置對(duì)照孔,，也就是含有細(xì)胞的培養(yǎng)基+CCK8，這個(gè)數(shù)值是板上的比較大數(shù)值,，CCK8試驗(yàn)比較好OD值在1.0附近,，所以這個(gè)比較大數(shù)值比較好能控制在1.0左右。我的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)是不要讓細(xì)胞長(zhǎng)滿,，一旦長(zhǎng)滿了很難去判斷是否堆積生長(zhǎng)了,，對(duì)***能否順利進(jìn)入細(xì)胞有影響此為其一,，其二生長(zhǎng)不均勻易導(dǎo)致孔間OD值數(shù)據(jù)偏差大,，而且OD值也很大?？蒲泄?*值錢的就是時(shí)間,不能再被CCK8“拖累”了.北京cck8 ic50

這個(gè)CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.湖北cck8 波長(zhǎng)

。一般情況下,，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用,。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間,，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí),，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8,，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照,。金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛,、氯化鐵,、硫酸銅會(huì)***5%,、15%,、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí),。如果終濃度是10 mM的話,，將會(huì)*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難,，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。湖北cck8 波長(zhǎng)