培養(yǎng)基對(duì)CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同,，（主要是氨基酸的成分及糖含量）,，會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng),，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致,，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93,；1640培養(yǎng)基在0.5左右,。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收,，但不影響測定,，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要,，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照,。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個(gè)HIF1a***劑實(shí)驗(yàn)時(shí),，多加了這個(gè)***劑的濃度,，CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測原理.江蘇cck8圖

CCK-8（CellCountingKit-8）細(xì)胞活性和增殖檢測是醫(yī)學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其原理是該試劑中含有WST-8,，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）,。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析,。以下是CCK-8檢測的具體步驟：細(xì)胞活性檢測1.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100ml/孔),。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)(在37℃，5%CO2的條件下),。江蘇cck8需要避光嗎CCK8系列簡稱終于來了.

CCK-8的用途1.細(xì)胞增殖測定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到,，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等,。

2.***篩選：在測定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí),，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8。

3.細(xì)胞毒性測定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響,，比如在UV,、低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上。

4.**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的,，我見過做**的團(tuán)隊(duì),，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買,，比如果子老師所在的團(tuán)隊(duì),，哈哈哈。

5.微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn),。

貼壁生長的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長24h了,，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便,。沒人愿意大半夜爬起來做實(shí)驗(yàn)吧,。3、加藥后的孵育時(shí)間,，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間,，24h，48h,，72h,。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時(shí)間,。太長了就沒有必要了,，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了,。4、CCK8試劑加入量,，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%,。這里有一個(gè)問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢,，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升,，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致,。本人**終采用的是后者,。5、cck8試劑加入后孵育時(shí)間,，隨著時(shí)間的增加,，OD值就會(huì)增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右,。這里我考察了0.5h、1.0h,、2.0h,。細(xì)胞增殖測定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到，比如**相關(guān),、損傷后修復(fù)等,。

CCK8檢測原理圖2操作步驟1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）,。2、細(xì)胞處理（不同實(shí)驗(yàn)處理方式不同）,。3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。5,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。6,、若暫時(shí)不測定OD值,，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠,，重現(xiàn)性好.江蘇加cck8

細(xì)胞增殖檢測——CCK8.江蘇cck8圖

CCK法與其他細(xì)胞增殖/毒性檢測方法的優(yōu)勢比較檢測方法MTT法XTT法WST-1法CCK法甲臜產(chǎn)物的水溶性差（需加有機(jī)溶劑溶解再檢測）好好好產(chǎn)品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用即開即用即開即用檢測靈敏度高很高很高高檢測時(shí)間較長較短較短**短檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細(xì)胞毒性高,，細(xì)胞形態(tài)完全消失很低，細(xì)胞形態(tài)不變很低,，細(xì)胞形態(tài)不變很低,，細(xì)胞形態(tài)不變?cè)噭┓€(wěn)定性一般較差一般很好批量樣品檢測可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷江蘇cck8圖