目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***,，如實體瘤和大腦,。通常情況下，只能到達并轉(zhuǎn)染細胞的外層,，從而導致***效果不佳,。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體,，似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進行細胞間通訊來克服這一點,。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞,。在被釋放到細胞外環(huán)境后,，由于其表面存在細胞識別分子，它們可以與鄰近細胞融合,。外泌體外泌體是細胞間mRNA,、小rna (miRNA)和信號因子的載體，通過經(jīng)歷細胞內(nèi)化和釋放的幾個周期,，能夠跨越幾層組織,。它們可以由多種細胞分泌，包括腫瘤細胞,、樹突狀細胞,、B細胞、T細胞,、上皮細胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中,。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動脂質(zhì)體和外泌體之間的融合事件來實現(xiàn),。在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。上海siRNA轉(zhuǎn)染試劑
轉(zhuǎn)染時通常推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基,，包括陽離子轉(zhuǎn)染試劑,，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax,。這種轉(zhuǎn)染活動需要形成陽離子脂質(zhì)體-DNA復合物,，這需要帶正電的脂質(zhì)體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此,，血清中負電荷分子的存在可能會影響這種復雜的相互作用,，從而影響轉(zhuǎn)染效率。然而,，發(fā)現(xiàn)10%血清的存在導致FuGENE HD,、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉(zhuǎn)染MCF-7,、HeLa,、C2C12和MC3T3的轉(zhuǎn)染效率更高。研究表明,，轉(zhuǎn)染中少量的血清可以通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)染復合物的zeta電位來改善轉(zhuǎn)染復合物與其宿主細胞表面之間的表面相互作用,。河北小鼠轉(zhuǎn)染試劑在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應先確定其實驗需要,。
在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前,，應先確定其實驗需要,。例如,，siRNA*對一個靶標具有高度特異性,，而miRNA具有調(diào)節(jié)多個下游靶標的潛力,。如今,，可以人工合成各種類型的短長度寡核苷酸來模仿小RNA分子,，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑,。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA,、miRNA或siRNA)，其結(jié)構(gòu)使其能夠與目標mRNA結(jié)合以抑制其功能,，從而導致特定基因的翻譯抑制,。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸,，它將與互補的小RNA鏈(如miRNA)結(jié)合以拮抗其活性,，從而增加目標基因的表達。
選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個因素,，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染),。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉(zhuǎn)染,。哺乳動物原代細胞由于其有限的壽命和有限的擴增能力,，通常比其他細胞類型更不容易受到轉(zhuǎn)染。非脂質(zhì)體試劑在轉(zhuǎn)染人原代細胞方面優(yōu)于脂質(zhì)體試劑,，包括PEC,、HASMC和HAEC、人原代成肌細胞和AGS,。相比之下,，據(jù)報道，基于脂質(zhì)體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉(zhuǎn)染其他原代人細胞(如原代臍帶靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質(zhì)體試劑產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素,。
不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細胞系后,，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性,。這些大量的測試表明,，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉(zhuǎn)染方法相當。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體,、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉(zhuǎn)染劑對COS-1細胞系(非洲綠猴腎成纖維細胞樣細胞)使用四種不同的轉(zhuǎn)染介質(zhì)所取得的轉(zhuǎn)染效果,。固體脂質(zhì)na-noparticles轉(zhuǎn)染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉(zhuǎn)染組的熒光素酶基因表達效率沒有統(tǒng)計學上的***差異，在每種轉(zhuǎn)染介質(zhì)中保持相同水平,。然而,，獲得的轉(zhuǎn)染效率低于使用商業(yè)轉(zhuǎn)染劑EscortTM 的效率，該轉(zhuǎn)染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成,。研究人員通過在HepG2細胞(人肝細胞肝*細胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒,，實現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達水平。轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細胞的過程,，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細胞中表達,。陜西重慶轉(zhuǎn)染試劑
評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中,。上海siRNA轉(zhuǎn)染試劑
在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后,，轉(zhuǎn)基因表達相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達量每周減少約1log,。造成這種現(xiàn)象的機制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對外源基因產(chǎn)物的新***抗體,，(b)細胞因子介導的啟動子關(guān)閉，(c)通過凋亡,、先天或適應性免疫反應根除表達細胞以及（d）表達基因的細胞因細胞凋亡而減少是導致表達減少,。這些機制具有重要意義，因為不可能重復給藥,，而且轉(zhuǎn)基因凈表達會隨著時間的推移而減少。盡管通過中和或消除細胞因子的產(chǎn)生可以提高肺中的基因表達水平,。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的增加,，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學病變,，但肺部沒有不良反應,。這種增加可以通過使用較少的細胞毒性陽離子脂質(zhì)體（CLs）來控制。轉(zhuǎn)氨酶的釋放歸因于未甲基化的堿基,，如pDNA序列中的胞嘧啶和鳥嘌呤,。上海siRNA轉(zhuǎn)染試劑