siRNA脂質體

RNA干擾(RNAi)途徑允許siRNA和miRNAs負向調(diào)節(jié)蛋白表達,。siRNA是21～23對核苷酸組成的雙鏈RNA，可誘導同源靶mRNA沉默,。為了發(fā)揮作用,，雙鏈siRNA分裂成兩個單鏈RNA:乘客鏈和引導鏈,。乘客鏈被argonaute-2蛋白降解,而引導鏈則被納入RNAi誘導的沉默復合體中，該復合體結合與引導鏈互補的mRNA并將其切割,。siRNA似乎具有***多種疾病的巨大潛力,，因為它們可以很容易地下調(diào)各種靶mRNA，而不考慮它們的位置(即在細胞核或細胞質中),，并且它們的特異性結合表明它們比傳統(tǒng)化學藥物誘導的副作用更少,。作為一種新型的基于核酸的***策略，siRNA***與傳統(tǒng)的化學藥物相比具有許多優(yōu)勢,。然而,，為了促進基于siRNA的***方法的發(fā)展，必須克服一些挑戰(zhàn),，包括需要識別適當?shù)陌谢蚝烷_發(fā)優(yōu)化的遞送系統(tǒng),。許多研究人員試圖利用陽離子脂質體提高siRNA的細胞遞送和基因沉默效率。例如,，由DC-6-14,、DOPE和膽固醇組成的陽離子脂質體被用于遞送螢火蟲熒光素酶特異性的siRNA。當陽離子脂質體與siRNA持續(xù)劇烈攪拌混合時,，轉染效率提高,，說明將siRNA加載到陽離子脂質體上的方法可以調(diào)節(jié)轉染效率。siRNA脂叢的***應用因靶蛋白而異,。 Zeta電位被認為是影響細胞攝取和藥物傳遞的重要因素之一,。北京企業(yè)脂質體載藥

為了***免疫性疾病，將針對甘油醛3-磷酸脫氫酶(***DH)的siRNA與含1,2-dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane,、DSPC和膽固醇的陽離子脂質體絡合,。用該復合物(5mg/kgsiRNA)處理小鼠，4天后,，腹腔巨噬細胞和樹突狀細胞的***DH表達量減少40%,，脾源性抗原呈遞細胞的***DH表達量減少60%。在其他研究中,，將重鏈鐵蛋白特異性siRNA與陽離子脂質體結合,，并局部給藥于荷U251細胞的人膠質瘤小鼠。**內(nèi)注射鐵蛋白特異性siRNA與DC-Chol和DOPE組成的陽離子脂質體復合物,，其抑制**生長的程度與卡莫司定(一種主要用于膠質瘤***的DNA烷基化劑)相當,。argonaute-2特異性siRNA已被證明可誘導細胞凋亡，使用由DC-6-14,、DSPC,、DOPE和DSPC-PEG2000組成陽離子脂質體遞送argonaute-2特異性siRNA時發(fā)現(xiàn),，將這些復合物靜脈注射到接種Lewis肺*的小鼠體內(nèi)(每隔一天1mg/kg，共5次),，這些復合物可降低**組織中argonaute-2的表達,，并***抑制**生長。北京企業(yè)脂質體載藥脂質體根據(jù)室室結構和層狀結構可分為單層囊泡(ULVs),、寡層囊泡(OLVs),、多層囊泡(MLV)和多泡脂質體(MVLs)。

脂質體共價連接藥物-脂質偶聯(lián)載***式通過連接劑將藥物分?與脂質共價連接是另?種在脂質體內(nèi)裝載藥物的有效策略,，例如Mepact,。MDP是主要?蘭?陽性菌細胞壁的組成部分，具有****應答的作?,。由于MDP是?溶性低分?量分?,，其脂質體在儲存過程中存在包封效率低和藥物泄漏等問題。為了提?MDP的脂溶性,，通過肽間隔劑將MDP與PE連接,，合成MTP-PE(muramyltripeptide-phosphatidylethanolamine)。在??理鹽?重建凍?產(chǎn)物(MTP-PE,POPC和OOPS)時,，MTP-PE的兩親分?嵌?脂質體的膜雙層,。脂質體內(nèi)存在MTP-PE，未發(fā)現(xiàn)游離MTP-PE,。Vyxeos采?被動加載和主動加載相結合的?法,，這是?個被批準在同?囊泡中加載兩種不同藥物(阿糖胞苷和柔紅霉素)的脂質體。簡??之,，當脂質泡沫與Cu(葡糖酸鹽)2,、三?醇胺(TEA)、pH7.4和阿糖胞苷溶液?合時,，阿糖胞苷被被動地封裝到脂質體中,。經(jīng)過減漿和緩沖液交換以去除未包封的藥物和Cu(葡糖酸鹽)2/TEA后，中性pH的柔紅霉素緩沖液與載糖胞苷脂質體孵育,。

脂質體靶向遞送中**核靶向功能已知**具有核靶向功能,。為了增強質粒DNA的核轉運，**與PAMAM樹狀大分子偶聯(lián),，與DOPE(1:1)混合形成脂質體,。與聚亞胺相比，PAMAM-**/DOPE陽離子脂質體增強了HEK293細胞中質粒DNA的表達,，并顯示出較低的細胞毒性(m.w.25,000),。總的來說，靶向配體的修飾可以幫助實現(xiàn)特異性靶向,，避免非特異性分布到肝臟和其他組織,。然而，從商業(yè)化的角度來看,，配體定制技術仍然面臨許多障礙，包括需要更流線型的制造工藝和改進的質量控制,。陽離子脂質體遞送化藥和核酸的優(yōu)勢,。

寡核苷酸脂質體

寡核苷酸是一種<50個堿基的短核酸聚合物。AS-ODN（反義寡脫氧核苷酸）是與互補的mRNA序列結合的單鏈DNA或RNA,。由于AS-ODNs可以下調(diào)某些RNA并抑制靶蛋白的表達,，因此它們被認為具有作為核酸藥物的潛力。然而,，為了開發(fā)基于寡核苷酸的***方法,，必須克服寡核苷酸在生理環(huán)境中的不穩(wěn)定性及其細胞攝取不足的問題。Zhang及其同事開發(fā)了由1,2-二油?；?3-三甲銨基丙烷(DOTAP),、磷脂酰膽堿和膽固醇組成的陽離子脂體，用于針對Raf-1蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶(一種已知的*****靶標信號蛋白)的AS-ODNs全身遞送,。他們觀察到,全身給藥AS-ODNs與陽離子脂質體復合物可降低肝臟和**組織中Raf-1蛋白的表達,，并抑制小鼠PC-3**的生長。在另一項研究中,，bcl2特異性AS-ODNs與魚精蛋白和陽離子脂質體(由DC-Chol,、磷脂酰膽堿和DSPE-PEG2000組成)絡合。脂質體***增加Bcl-2AS-ODNs的細胞攝取,，導致Bcl-2蛋白水平***下調(diào),。研究了AS-ODNs和陽離子脂質體***特應性皮炎的療效。將靶向白介素-13的AS-ODNs與DOTAP和膽酸鈉組成的陽離子脂質體配合,，局部應用于特應性皮炎小鼠皮損,。這種***劑量依賴性地緩解了特應性皮炎，200ugIL-13的AS-ODNs的抑制作用比較大,。 被動載藥?法是在脂質體制備過程中對藥物進?包封的方法,。靶向脂質體載藥研發(fā)

載藥脂質體可以采用超濾法、凝膠過濾法,、低速離心法,、透析法等多種方法來純化。北京企業(yè)脂質體載藥

陰離子脂體由帶負電荷的脂質組成,，如磷脂酰甘油,、磷脂酰絲氨酸和磷脂酸，由于它們被巨噬細胞攝取，循環(huán)時間縮短,。帶負電的小脂質體比其對應的中性和帶正電的脂質體被***得更快,。此外，在帶負電荷的小脂質體中觀察到一種雙相***模式,。 另一方面,， 與中性和帶正電的脂質體相比， 血液單核細胞和肺在帶負電的大脂質體的攝取中起主要作用,。表面修飾的脂質體(攜帶配體)比天然脂質體更容易被***,。 然而， 脂質體通過摻入膽固醇可在一定程度上減少肝臟對脂質體的攝取,， 這可能會使磷脂包裝轉變?yōu)楦鼒杂灿行虻哪?。北京企業(yè)脂質體載藥