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上海DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

來源: 發(fā)布時間:2025-02-07

對于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞如人胚腎細(xì)胞(HEK293)和人宮頸*細(xì)胞(HeLa),,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對較高,。這些細(xì)胞具有較強(qiáng)的內(nèi)吞能力,能夠有效地攝取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物,。例如,,在標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染條件下,HEK293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到50%-70%,。而對于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞,,如原代肝細(xì)胞和某些神經(jīng)細(xì)胞,其轉(zhuǎn)染效率較低,。這是因為它們的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,,可能存在較厚的糖萼或者緊密的細(xì)胞間連接,阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進(jìn)入,。例如,,原代肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。

一般來說,,貼壁細(xì)胞對脂質(zhì)體的耐受性相對較好,。但是,,在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下,,即使是耐受性好的細(xì)胞也會受到影響。例如,,HeLa細(xì)胞在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時,,可能會出現(xiàn)細(xì)胞膜完整性受損,表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)釋放增加,,細(xì)胞的代謝活動也會受到一定程度的干擾,。對于難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞,由于其本身比較脆弱,,較低濃度的脂質(zhì)體也可能產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒性,。比如原代神經(jīng)細(xì)胞,脂質(zhì)體可能會破壞其精細(xì)的神經(jīng)突起結(jié)構(gòu),,影響細(xì)胞的正常生理功能,。 是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體(CLs)表面結(jié)合,形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的,。上海DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

三,、脂質(zhì)體組成對轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響:研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對不同類型細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如,四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率不同,。Huh7和AGS細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1,;COS7細(xì)胞是T3P1和T1P1;A549細(xì)胞是T1P1和T1P36,。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響:脂質(zhì)體復(fù)合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu),,但在所有使用的細(xì)胞系中,特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢6,。四,、其他因素的影響血清的影響:對于某些細(xì)胞,血清的存在會影響轉(zhuǎn)染效率,。如Siha細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時轉(zhuǎn)染效率更高,,而在Caco-2細(xì)胞的轉(zhuǎn)染中,血清在本實驗室條件下并不影響轉(zhuǎn)染效率19,。細(xì)胞傳代次數(shù):Caco-2細(xì)胞在2-5次細(xì)胞傳代時轉(zhuǎn)染效率比較高9,。綜上所述,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對不同類型細(xì)胞的影響存在多方面的差異,,包括轉(zhuǎn)染效率,、影響因素以及脂質(zhì)體組成等。在進(jìn)行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗時,,需要根據(jù)不同的細(xì)胞類型優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,,以獲得比較好的轉(zhuǎn)染效果。武漢轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長超過20個殘基時,,它與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒,。

轉(zhuǎn)染時間對奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的影響:在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中,應(yīng)用帶有FAM標(biāo)記的miRNA-185mimics為報告基因,,檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑(LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000)在細(xì)胞接種不同時間后的轉(zhuǎn)染效率33,。結(jié)果顯示,無論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑,,12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18,、24h,LipofectamineRNAiMAX各時間點(diǎn)的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000,。并且,,使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時,12h的熒光強(qiáng)度也比較高,。這說明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中,,選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染時間可以提高轉(zhuǎn)染效率。同時,,該研究未明確轉(zhuǎn)染對細(xì)胞死亡的影響,,但可以進(jìn)一步研究不同轉(zhuǎn)染條件下細(xì)胞的存活率,,以確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低細(xì)胞死亡的比較好條件。

    對基因表達(dá)的影響:在微小RNA-1180轉(zhuǎn)染對腎*細(xì)胞生長的影響的研究中,,腎*細(xì)胞分為兩組:dsControl組和miR-1180組,。實時定量(qRT)-PCR檢測p21mRNA的表達(dá)變化,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后,,786-O和ACHN細(xì)胞中p21mRNA水平分別上調(diào)(P〈)和(P〈),,p21蛋白表達(dá)趨勢與qRT-PCR結(jié)果相符,CDK4,、CDK6和CyclinD1蛋白的表達(dá)明顯下調(diào),。同時,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測細(xì)胞周期變化顯示細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期,,MTS結(jié)果顯示細(xì)胞活力明顯降低,,集落形成實驗顯示細(xì)胞增殖能力降低。結(jié)論是miR-1180能******腎*細(xì)胞中p21蛋白的表達(dá),,并抑制腎*細(xì)胞786-O和ACHN的生長1,。在微小RNA-330-5p過表達(dá)對宮頸*細(xì)胞C33A中腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子4(TRAF4)基因表達(dá)的抑制作用和對C33A細(xì)胞增殖的影響的實驗中,通過Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑分別向?qū)m頸*細(xì)胞系C33A瞬時轉(zhuǎn)染miR-330-5p模擬物(設(shè)為實驗組)或者轉(zhuǎn)染miR-NC(設(shè)為對照組),,結(jié)果顯示與對照組相比,,實驗組C33A細(xì)胞中TRAF4mRNA下降(p<),TRAF4蛋白下降(p<),。集落形成實驗顯示,,實驗組C33A細(xì)胞的增殖能力明顯下降(p<)。結(jié)論是miR-330-5p可通過降低宮頸*細(xì)胞C33A中TRAF4的表達(dá)抑制宮頸*細(xì)胞C33A的增殖,。 小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率,。

動物視網(wǎng)膜成像技術(shù)為基礎(chǔ)研究提供了有力工具。從小鼠視網(wǎng)膜多種成像方式探討眼科光學(xué)成像技術(shù)進(jìn)展:張鵬飛,、張廷瑋,、宋維業(yè)闡述了近年來在小鼠和人眼視網(wǎng)膜高精度光學(xué)成像領(lǐng)域出現(xiàn)的技術(shù)突破6。幾種在人眼視網(wǎng)膜成像中廣泛應(yīng)用的光學(xué)成像技術(shù)在動物視網(wǎng)膜中得到了成功應(yīng)用,,實現(xiàn)了對動物視網(wǎng)膜的高精度細(xì)胞級別成像,為科研工作者提供了有力工具,。同時,,動物視網(wǎng)膜的研究工作也開發(fā)了一些新型成像技術(shù)或增強(qiáng)了對人眼視網(wǎng)膜功能機(jī)理的理解。綜上所述,,動物成像技術(shù)在磁共振成像,、熱成像、X射線發(fā)光成像,、近紅外高光譜成像,、非人靈長類動物超高場磁共振腦成像,、新型動物搖籃的小動物多重成像、紅外成像以及動物視網(wǎng)膜成像等方面都取得了***的發(fā)展,,為動物研究和相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展提供了重要的技術(shù)支持,。轉(zhuǎn)染時推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基包括陽離子轉(zhuǎn)染試劑,如Lipofectamine,、HiperFect 和EndofectinMax,。安徽轉(zhuǎn)染試劑便宜

化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率可能取決于幾個因素,如使用的試劑類型,、靶細(xì)胞的來源和性質(zhì),,以及選擇的DNA與試劑比例。上海DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的轉(zhuǎn)染機(jī)制存在多種差異,。以下將詳細(xì)闡述不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中轉(zhuǎn)染機(jī)制的差異表現(xiàn),。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑:機(jī)制概述:脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑通常由陽離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)組成,其轉(zhuǎn)染機(jī)制主要是通過與帶負(fù)電的RNA分子結(jié)合,,形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物,。這個復(fù)合物能夠與細(xì)胞膜相互作用,通過內(nèi)吞作用或膜融合等方式進(jìn)入細(xì)胞,。進(jìn)入細(xì)胞后,,脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物逐漸釋放RNA分子,使其能夠在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用,。在不同細(xì)胞類型中的表現(xiàn):在腎*細(xì)胞系786-O和ACHN中,,目前雖未明確提及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的作用,但可以推測其可能通過類似的機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞,,影響細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)和細(xì)胞生長,。例如,微小RNA-1180(miR-1180)轉(zhuǎn)染對腎*細(xì)胞生長產(chǎn)生影響,,雖然未明確指出轉(zhuǎn)染試劑類型,,但脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可能在類似的研究中發(fā)揮作用1。在MEF細(xì)胞,、3T3細(xì)胞,、Hela細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞中,MessageMax脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入細(xì)胞,,并實現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細(xì)胞核中的定位,。這表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑在不同類型的細(xì)胞中能夠有效地將RNA分子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi),并實現(xiàn)特定蛋白的表達(dá),。上海DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑