核細(xì)胞,、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞,、間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）：選擇兩種合成轉(zhuǎn)染試劑（陽離子脂質(zhì)商業(yè)試劑LipofectamineRNAiMAX和聚乙烯亞胺（PEI））以及兩種天然衍生轉(zhuǎn)染試劑（多糖殼聚糖（98%脫乙酰化）和透明質(zhì)酸（20%酰胺化））,，用于將siRNA遞送到包括髓核細(xì)胞,、關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞在內(nèi)的原代間充質(zhì)細(xì)胞中。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（***DH）作為內(nèi)源性模型基因,，在轉(zhuǎn)染后第3天和第6天評(píng)估由20nM或200nMsiRNA引起的沉默程度,。除了沉默效率外,，還評(píng)估了細(xì)胞毒性、DNA含量變化和細(xì)胞分化潛能等非特異性影響,。在四種轉(zhuǎn)染試劑中,，基于商業(yè)脂質(zhì)體的試劑在20nMsiRNA時(shí)是**有效的siRNA遞送試劑，其次是殼聚糖,。使用陽離子脂質(zhì)體,、殼聚糖和PEI轉(zhuǎn)染顯示出不同程度的活力和DNA含量下降，這取決于所評(píng)估的siRNA劑量和細(xì)胞類型,，但與***DH敲低無關(guān),。一些對DNA含量的影響并不伴隨著活力的相應(yīng)變化。然而,，細(xì)胞周期抑制或進(jìn)展的標(biāo)記基因（如p21和PCNA）的表達(dá)變化不能解釋DNA含量的變化,。有趣的是，發(fā)現(xiàn)了***DH活性的非特異性上調(diào),，這***于軟骨細(xì)胞15,。肝*細(xì)胞HepG2和：比較兩種人類細(xì)胞模型中兩種轉(zhuǎn)染劑，即基于脂質(zhì)體的Lipofectamine?RNAiMAX和基于聚合物的GenMute?,。 由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn),，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場變革。內(nèi)蒙古陽離子轉(zhuǎn)染試劑

RNA轉(zhuǎn)染試劑是一類能夠?qū)NA分子導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì),，其作用原理主要涉及以下幾個(gè)方面,。利用電荷相互作用：許多RNA轉(zhuǎn)染試劑是陽離子性的，它們可以與帶負(fù)電荷的RNA分子通過靜電相互作用結(jié)合形成復(fù)合物,。例如,，魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物，由于相反電荷驅(qū)動(dòng)的耦合作用,，被用于細(xì)胞內(nèi)核酸的遞送8,。魚精蛋白不僅可以保護(hù)RNA免受生物系統(tǒng)中的降解，還能增強(qiáng)其對細(xì)胞的穿透能力,。陽離子脂質(zhì)體也是常見的轉(zhuǎn)染試劑之一,。以LipofectamineTM2000為例，它可以介導(dǎo)攜帶綠色熒光蛋白基因的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至雞成骨細(xì)胞9,。陽離子脂質(zhì)體通過其陽離子頭部與RNA的負(fù)電荷相互作用,，形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物，然后通過與細(xì)胞膜的融合或內(nèi)吞作用將RNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi),。內(nèi)吞作用途徑：一些RNA轉(zhuǎn)染試劑通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,。如合成的8-mer兩親性反式多聚2'-O-甲基尿苷硫代磷酸三酯RNA元件（2'-OMeUtaPS），它能介導(dǎo)將不帶電荷的聚A尾磷酸二酰胺基嗎啉代序列（PMO）高效遞送至HeLapLuc705細(xì)胞或肌管肌肉細(xì)胞,。已確定大胞飲作用是HeLapLuc705細(xì)胞中使用的主要內(nèi)吞途徑,。河北合肥轉(zhuǎn)染試劑deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。

二,、影響因素的差異細(xì)胞接種密度：不同類型的細(xì)胞在比較好轉(zhuǎn)染效率下的細(xì)胞接種密度不同,。例如，宮頸*細(xì)胞Hela和Siha的比較好接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個(gè)細(xì)胞1,，而研究中Caco-2細(xì)胞的比較好接種密度為2×10?9,。DNA用量：各種細(xì)胞所需的DNA用量也存在差異,。如PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染的比較好DNA用量為2μg3,，而Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)比較好DNA用量為4μg9,。脂質(zhì)體與DNA的比例：不同細(xì)胞類型對應(yīng)的比較好脂質(zhì)體與DNA的比例不同,。Hela細(xì)胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5,，Siha細(xì)胞中為1:0.71,；Caco-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)比較好脂質(zhì)體與DNA比例為2.5:19,。復(fù)合物形成時(shí)間和孵育時(shí)間：不同細(xì)胞類型對脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物的形成時(shí)間和細(xì)胞與復(fù)合物的孵育時(shí)間要求不同。例如,，Hela和Siha細(xì)胞未明確提及復(fù)合物形成時(shí)間和孵育時(shí)間,，而Caco-2細(xì)胞的比較好脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物形成時(shí)間為30min,，細(xì)胞與復(fù)合物孵育時(shí)間為6h9。

    emlikiForestvirus相關(guān)細(xì)胞：利用基于SemlikiForestvirus的RNA和DNA向量研究非病毒細(xì)胞穿透肽遞送載體PepFect6與陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000的轉(zhuǎn)染效率,，并評(píng)估它們對病毒復(fù)制的影響,。結(jié)果表明,，PepFect6***證明能夠?qū)⒋螅?3-19kbp）構(gòu)建體轉(zhuǎn)運(yùn)穿過細(xì)胞膜。但使用PepFect6試劑遞送的DNA分子被發(fā)現(xiàn)比使用Lipofectamine2000試劑遞送的DNA分子晚約。***,，雖然PepFect6和Lipofectamine2000試劑都可用于alphavirus研究，但PepFect6更受青睞,，因?yàn)樗粫?huì)引起正常細(xì)胞表型的變化，也不會(huì)影響先前轉(zhuǎn)染細(xì)胞中病毒的正常復(fù)制***周期12。奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞：應(yīng)用帶有FAM標(biāo)記的miRNA-185mimics為報(bào)告基因,，檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細(xì)胞接種12,、18,、24h后的轉(zhuǎn)染效率,。結(jié)果顯示,，無論使用Lipofectamine2000還是LipofectamineRNAiMAX作為奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑,，各組間12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18,、24h,，18h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于24h；LipofectamineRNAiMAX各時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000,。使用LipofectamineRNAiMAX作為奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染試劑時(shí),，12h的熒光強(qiáng)度極***高于18、24h,。 用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化,，這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒,。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種常用的基因轉(zhuǎn)染方法,，不同類型的細(xì)胞在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染過程中會(huì)表現(xiàn)出不同的特性和差異。以下是對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對不同類型細(xì)胞影響差異的詳細(xì)分析：

一、轉(zhuǎn)染效率的差異宮頸*細(xì)胞：對于Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞,，當(dāng)細(xì)胞接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個(gè)細(xì)胞,，miRNA量為1μl,，Hela細(xì)胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5,，Siha細(xì)胞中為1:0.7時(shí)，24小時(shí)后可獲得比較高轉(zhuǎn)染效率1,。與含血清的培養(yǎng)基相比，只有Siha細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí),，在轉(zhuǎn)染前能獲得更高的轉(zhuǎn)染效率（P＜0.01）1,。PC12細(xì)胞：lipo2000轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞的比較好轉(zhuǎn)染條件為lipo2000用量為5μL，DNA2μg,，轉(zhuǎn)染時(shí)間為6h,，這種條件下的PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染率高達(dá)40%，且未影響細(xì)胞的正常分泌3,。HepG2細(xì)胞：陽離子脂質(zhì)體的擴(kuò)散系數(shù)在lipoplex形成過程中與lipoplex的物理化學(xué)特性,、lipoplex中質(zhì)粒DNA的可及性以及每代謝活性的基因表達(dá)對數(shù)密切相關(guān)2,。隨著脂質(zhì)體尺寸的增加,，主要的內(nèi)吞途徑從網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞轉(zhuǎn)變?yōu)橹そ閷?dǎo)的內(nèi)吞,，此外,，所有脂質(zhì)體尺寸均觀察到巨胞飲作用2。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞：脂質(zhì)體介導(dǎo)的CD基因在鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中成功表達(dá)，于轉(zhuǎn)染48h后達(dá)峰值5。

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA,，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑,。吉林轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格

轉(zhuǎn)染是將外來核酸傳遞到真核細(xì)胞中以修飾宿主細(xì)胞的遺傳組成的過程,。內(nèi)蒙古陽離子轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間對奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的影響：在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，應(yīng)用帶有FAM標(biāo)記的miRNA-185mimics為報(bào)告基因,，檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細(xì)胞接種不同時(shí)間后的轉(zhuǎn)染效率33,。結(jié)果顯示,，無論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑,，12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18,、24h,，LipofectamineRNAiMAX各時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且,，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時(shí),，12h的熒光強(qiáng)度也比較高,。這說明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染時(shí)間可以提高轉(zhuǎn)染效率,。同時(shí),，該研究未明確轉(zhuǎn)染對細(xì)胞死亡的影響,，但可以進(jìn)一步研究不同轉(zhuǎn)染條件下細(xì)胞的存活率，以確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)降低細(xì)胞死亡的比較好條件。內(nèi)蒙古陽離子轉(zhuǎn)染試劑