考慮細(xì)胞毒性低細(xì)胞毒性的轉(zhuǎn)染試劑對于保持細(xì)胞的活性和正常生理功能至關(guān)重要,。評估細(xì)胞活力：可以通過檢測細(xì)胞的存活率、增殖能力等指標(biāo)來評估轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞毒性,。在研究不同轉(zhuǎn)染試劑對C2C12細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率時，通過優(yōu)化DNA:轉(zhuǎn)染劑比例和細(xì)胞密度,，使所有試劑在達(dá)到較高轉(zhuǎn)染效率的同時,，對細(xì)胞生長和活力的影響有限6。在比較不同轉(zhuǎn)染試劑遞送siRNA的攝取,、敲低效率和毒性情況的研究中,，新開發(fā)的CALNPRNAi轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率***高于傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑，同時毒性比較低7,。選擇溫和的試劑：一些轉(zhuǎn)染試劑可能對細(xì)胞的毒性較小,，例如基于脂質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑通常比基于病毒的轉(zhuǎn)染試劑更溫和。在顱內(nèi)遞送合成mRNA的研究中,，使用常用的轉(zhuǎn)染試劑將合成mRNA遞送至小鼠大腦,，結(jié)果表明該模型中合成mRNA可以成功遞送至大腦，且沒有可測量的毒性8,。用二乙基氨基乙基修飾,，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒,。新疆長沙轉(zhuǎn)染試劑

魚精蛋白作為RNA遞送穩(wěn)定劑具有重要作用,，其具體作用機(jī)制主要包括以下幾個方面：一、保護(hù)RNA免受降解魚精蛋白是一種天然陽離子肽混合物,，由于其帶正電荷的特性,，可以與帶負(fù)電荷的RNA通過相反電荷驅(qū)動耦合23。在生物系統(tǒng)中,，RNA很容易被RNase降解,，而魚精蛋白可以與RNA復(fù)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物,，從而保護(hù)RNA免受降解1213,。例如，通過將單鏈RNA（ssRNA）與帶正電荷的蛋白魚精蛋白復(fù)合,，可以穩(wěn)定陰離子RNA1213,。二、增強(qiáng)細(xì)胞穿透性魚精蛋白不僅可以保護(hù)RNA,，還能增強(qiáng)RNA的穿透細(xì)胞的能力,。魚精蛋白-RNA復(fù)合物的形成具有雙重功能,，一方面保護(hù)RNA不被降解，另一方面增強(qiáng)其穿透進(jìn)入細(xì)胞的能力23,。這種增強(qiáng)的細(xì)胞穿透性可能是由于魚精蛋白的陽離子性質(zhì),，使其能夠與細(xì)胞膜相互作用,，促進(jìn)RNA的進(jìn)入細(xì)胞2,。中國香港PEI 轉(zhuǎn)染試劑基因是陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。

網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑呼吸道合胞病毒（RSV）是導(dǎo)致嬰幼兒***的主要病毒病原體,。研究表明,，網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)型內(nèi)吞途徑是目前研究得較為透徹且經(jīng)典的病毒入胞途徑。其中網(wǎng)格蛋白在此途徑中的地位很重要,。通過針對網(wǎng)格蛋白重鏈的小干擾RNA（siRNA）抑制網(wǎng)格蛋白的表達(dá),，可以有效的抑制RSV***Hela細(xì)胞。這提示網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑在病毒感染細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用,，同時也暗示了在某些情況下,，RNA轉(zhuǎn)染試劑可能利用這一途徑進(jìn)入細(xì)胞21。二,、小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑在研究非病毒載體用于小干擾RNA（siRNA）遞送時發(fā)現(xiàn),，將用組氨酸和半胱氨酸修飾的HIV-1Tat肽（mTat）與聚乙烯亞胺（PEI）結(jié)合，并與陽離子兩親脂質(zhì)基試劑INTERFERin（INT）組合成的雜合載體（mTat/PEI/INT）能高效遞送siRNA,。研究表明,，F(xiàn)ilipinIII和β-環(huán)糊精（小窩蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用抑制劑）能***抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉(zhuǎn)染，而氯丙嗪（網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用抑制劑）則不能抑制mTat/PEI/INT/siRNA轉(zhuǎn)染,。此外,，mTat/PEI/INT在4°C時的轉(zhuǎn)染效率明顯低于37°C。這些結(jié)果表明,，mTat/PEI/INT作為一種潛在的有吸引力的非病毒載體用于siRNA遞送,，其轉(zhuǎn)染過程可能是通過小窩蛋白介導(dǎo)且依賴溫度的內(nèi)吞途徑實現(xiàn)的。

轉(zhuǎn)染時間對奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染的影響：在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中,，應(yīng)用帶有FAM標(biāo)記的miRNA-185mimics為報告基因,，檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑（LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000）在細(xì)胞接種不同時間后的轉(zhuǎn)染效率33。結(jié)果顯示,，無論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑,，12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h,，LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000,。并且，使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時,，12h的熒光強(qiáng)度也比較高,。這說明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細(xì)胞中，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染時間可以提高轉(zhuǎn)染效率。同時,，該研究未明確轉(zhuǎn)染對細(xì)胞死亡的影響,，但可以進(jìn)一步研究不同轉(zhuǎn)染條件下細(xì)胞的存活率，以確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低細(xì)胞死亡的比較好條件,。PEI的分子量對細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響,。

對細(xì)胞周期的影響：在微小RNA-1180轉(zhuǎn)染腎*細(xì)胞的實驗中，F(xiàn)CM結(jié)果顯示,，轉(zhuǎn)染miR-1180后,，位于G0/G1期的細(xì)胞比例明顯增大，而位于S期和G2/M期的細(xì)胞比例明顯下降,，表明細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期1,。對轉(zhuǎn)染效率的影響：在脂質(zhì)體介導(dǎo)RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雞成骨細(xì)胞條件的優(yōu)化實驗中，對轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合度,、質(zhì)粒質(zhì)量與脂質(zhì)體體積比及轉(zhuǎn)染時間進(jìn)行優(yōu)化,，在熒光倒置顯微鏡下觀察并計算轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果表明,，在轉(zhuǎn)染前細(xì)胞融合達(dá)到90％以上,，質(zhì)粒DNA與脂質(zhì)體比例為1:2.5時轉(zhuǎn)染效率比較高，并且在轉(zhuǎn)染后48h轉(zhuǎn)染效果比較好3,。在篩選更優(yōu)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的實驗中,，分別用RNAiMax及MessageMax將modGFP轉(zhuǎn)染入MEF細(xì)胞，流式分析發(fā)現(xiàn)MessageMax的轉(zhuǎn)染效率為（83.33%±3.23%）,，略高于RNAiMax的（78.77%±6.12%）,，兩者沒有統(tǒng)計學(xué)差異，但是流式分析和熒光顯微鏡觀察均表明MessageMax轉(zhuǎn)染后1周內(nèi)的蛋白翻譯表達(dá)效率更高,，是更高效的modRNA轉(zhuǎn)染試劑8,。

RNA 轉(zhuǎn)染試劑的效果受到多種因素的影響，包括細(xì)胞類型,、轉(zhuǎn)染試劑種類,、轉(zhuǎn)染條件等。在實際應(yīng)用中,，需要根據(jù)具體的實驗需求選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑和優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,，以提高轉(zhuǎn)染效率并減少對細(xì)胞的毒性作用。 研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征,，這些特征增強(qiáng)了它們在體內(nèi)轉(zhuǎn)運核酸的能力,。西藏shRNA轉(zhuǎn)染試劑

在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下,。新疆長沙轉(zhuǎn)染試劑

    考慮RNA需求較少的RNA需求可以降低實驗成本,，同時也可以減少對細(xì)胞的潛在毒性,。比較不同試劑的RNA用量：不同的轉(zhuǎn)染試劑可能需要不同量的RNA才能達(dá)到相同的轉(zhuǎn)染效果。在選擇比較好的RNA轉(zhuǎn)染試劑并將其與電穿孔法進(jìn)行病毒RNA的比較的研究中,，某些商業(yè)轉(zhuǎn)染試劑在適當(dāng)優(yōu)化后,，細(xì)胞死亡少得多，RNA需求少,，轉(zhuǎn)染效率提高3,。考慮實驗規(guī)模：如果實驗需要大量轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，那么選擇RNA需求較少的試劑可以降低成本,。例如，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)實驗中,，選擇RNA需求少的轉(zhuǎn)染試劑可以節(jié)省成本和資源。四,、考慮血清兼容性在有血清的情況下能夠遞送RNA的轉(zhuǎn)染試劑可以簡化實驗操作,，提高實驗的可重復(fù)性。血清對轉(zhuǎn)染的影響：一些轉(zhuǎn)染試劑在有血清的情況下可能會降低轉(zhuǎn)染效率,，而另一些試劑則可以在血清存在的情況下正常工作,。在比較不同商業(yè)RNA轉(zhuǎn)染試劑將黃熱病病毒（YFV）和丙型肝炎病毒（HCV）RNA復(fù)制子遞送至Huh7細(xì)胞的能力的研究中，討論了與高效轉(zhuǎn)染相關(guān)的因素,，以及在存在血清的情況下能夠遞送RNA的優(yōu)勢3,。選擇血清兼容的試劑：如果實驗需要在有血清的條件下進(jìn)行，那么選擇血清兼容的轉(zhuǎn)染試劑是必要的,。例如,，在一些細(xì)胞培養(yǎng)實驗中，血清是細(xì)胞生長所必需的,。 新疆長沙轉(zhuǎn)染試劑