膜片鉗實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn),,記錄和分析數(shù)據(jù)準(zhǔn)備工作就緒后即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,,數(shù)據(jù)記錄和分析。對(duì)電極持續(xù)施加一個(gè)1mV,、10~50ms的階躍脈沖刺激,,電極入水后電阻約4~6MΩ,,此時(shí)在計(jì)算機(jī)屏幕顯示框中可看到測(cè)試脈沖產(chǎn)生的電流波形。開(kāi)始時(shí)增益不宜設(shè)得太高,,一般可在1~5mV/pA,,以免放大器飽和。由于細(xì)胞外液與電極內(nèi)液之間離子成分的差異造成了液結(jié)電位,,故一般電極剛?cè)胨畷r(shí)測(cè)試波形基線并不在零線上,,須首先將保持電壓設(shè)置為0mV,并調(diào)節(jié)“電極失調(diào)控制“使電極直流電流接近于零,。用微操縱器使電極靠近細(xì)胞,,當(dāng)電極尖銳端與細(xì)胞膜接觸時(shí)封接電阻指示Rm會(huì)有所上升,將電極稍向下壓,,Rm指示會(huì)進(jìn)一步上升,。通過(guò)細(xì)塑料管向電極內(nèi)稍加...
膜片鉗技術(shù)是通過(guò)微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,,在電學(xué)上分隔和電極尖開(kāi)口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域(膜片)以及其周圍,,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,對(duì)這膜片上的離子通道的離子電流(pA級(jí))進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄的方法,。測(cè)量回路的中心部分是使用場(chǎng)效應(yīng)管運(yùn)算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器,。當(dāng)場(chǎng)效應(yīng)管運(yùn)算放大器的正負(fù)輸入端子是等電位,向正輸入端子施加指令電位時(shí),,因?yàn)槎搪坟?fù)端子以及膜片都可等電位地達(dá)到鉗制的作用,,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時(shí),其間達(dá)到很小的分流電流,。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:通過(guò)滲透很快改變胞漿成分并達(dá)到平衡,。紹興藥理學(xué)膜片鉗哪家好膜片鉗使用的注意事項(xiàng):工作原理...
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)的數(shù)據(jù)如何處理:1.內(nèi)面向外式膜片細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細(xì)胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對(duì)通道活動(dòng)的影響。但實(shí)驗(yàn)中難以改變膜外側(cè)物質(zhì),且需浸于低鈣液中,。常用于研究依賴細(xì)胞內(nèi)鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細(xì)胞內(nèi)和第二信使與通道的調(diào)節(jié)作用,。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側(cè),可以任意改變膜外物質(zhì)的濃度,有利于研究離子、遞質(zhì)對(duì)膜外表面的作用,多用于研究細(xì)胞膜外側(cè)受體控制的離子通道,。這些受體直接作用于離子通道,而不需經(jīng)過(guò)第二信使系統(tǒng),。因細(xì)胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實(shí)驗(yàn)中難以改變胞內(nèi)成分,而且電極管內(nèi)必須...
膜片鉗系統(tǒng)有如下應(yīng)用局限性(1)光能應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的紀(jì)錄,,因此大部分的紀(jì)錄對(duì)象為化細(xì)胞,,而對(duì)于需要貼壁生長(zhǎng)的大多數(shù)正常細(xì)胞,現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)就無(wú)法紀(jì)錄,;(2)在紀(jì)錄對(duì)象上,,目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀(jì)錄胞膜形狀平整飽滿的細(xì)胞,大部分是工具細(xì)胞如化細(xì)胞,,此類細(xì)胞有比較強(qiáng)的細(xì)胞膜可以禁得起各種人為操作,,而許多具有研究?jī)r(jià)值的細(xì)胞(例如元代培養(yǎng)的神經(jīng)元)胞膜較弱容易破裂,,且胞體表面不規(guī)整,,現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場(chǎng),。因此,,迫切需要一種新型的全自動(dòng)膜片鉗電生理紀(jì)錄系統(tǒng)來(lái)解決以上問(wèn)題,。膜片鉗使用操作注意:不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,,拷數(shù)據(jù)時(shí)需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤(pán),。黃山全自動(dòng)膜片鉗電生理技術(shù)供應(yīng)商膜片鉗技...
一種提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法與流程:膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜上離子通道分子活動(dòng)的技術(shù),。是用來(lái)研究單個(gè)離體的活細(xì)胞,、組織切片或細(xì)胞膜片離子流的電生理實(shí)驗(yàn)技術(shù),。這項(xiàng)技術(shù)在可興奮細(xì)胞如神經(jīng)元,、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰腺細(xì)胞的研究中起至關(guān)重要的作用,,也可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細(xì)菌離子通道,。傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的技術(shù)要求非常高,一般地,,實(shí)驗(yàn)人員需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的長(zhǎng)期的訓(xùn)練,,才能準(zhǔn)確且快速的操作。全細(xì)胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄兩種,。膜片鉗使用操作注意:在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長(zhǎng)做好登記工作,。福州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)技術(shù)一種提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率...
膜片鉗法的各種模式:細(xì)胞吸附模式:將膜片微電極吸附在細(xì)胞膜上對(duì)但離子通道電流進(jìn)行記錄的模式。其優(yōu)點(diǎn)是在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境保持正常的條件下可以對(duì)離子通道活動(dòng)進(jìn)行觀察記錄,。但是由于不能認(rèn)為直接地控制細(xì)胞內(nèi)環(huán)境條件也不能確切的潘明細(xì)胞內(nèi)點(diǎn)位,,所以其缺點(diǎn)是不清楚膜片上的實(shí)效點(diǎn)位。膜內(nèi)面向外模式:從細(xì)胞吸附模式將已形成巨阻抗封接的膜片微電極向上提起時(shí),,則膜片即從細(xì)胞體上被切割分隔下來(lái),,形成膜內(nèi)面向外的模式。常規(guī)全細(xì)胞模式:在細(xì)胞吸附模式上將膜打穿成孔,,記錄膜片以外部位的全細(xì)胞膜的離子電流,,這時(shí)全細(xì)胞模式。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):信號(hào)準(zhǔn)確,,噪聲少,,使用了先進(jìn)的微型“法拉第板”替代傳統(tǒng)的“法拉第籠”。嘉興全自動(dòng)實(shí)...
膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:1)細(xì)胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片鉗的基本方式,其它方式由此衍生,。這種膜片形式比較穩(wěn)定因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過(guò)程是完整的,故對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和環(huán)境干擾比較小。但這種膜片形式易在電極形成囊泡,從而細(xì)胞骨架可能有所變化,。另外這種膜片不能控制細(xì)胞內(nèi)成分,。且任何影響膜電位的處理均可影響其電位水平。2)內(nèi)面向外式膜片( inside outpatch)細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細(xì)胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對(duì)通道活動(dòng)的影響,。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):干燥季節(jié)請(qǐng)先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電,。湖州全自...
膜片鉗技術(shù)的工作原理:膜片鉗技術(shù)是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具,,首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細(xì)胞膜封接,,通過(guò)吸破或者電破的方式使與電極尖開(kāi)口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域與其周圍區(qū)域在電學(xué)上分隔,,然后細(xì)胞膜破裂,進(jìn)而對(duì)此區(qū)域上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄的方法,。該方法普遍應(yīng)用于神經(jīng)細(xì)胞,,肌纖維細(xì)胞,心肌細(xì)胞及高表達(dá)單一通道的卵母細(xì)胞,。主要用于監(jiān)測(cè)離子通道在正?;蛘呒膊顟B(tài)下如何表現(xiàn),以及不同藥物,、離子或其他分析物如何改變這些狀態(tài),。膜片鉗技術(shù)的建立,對(duì)生物科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一項(xiàng)具有重大意義的變革,。這是一種通過(guò)離子通道記錄的離子電...
膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),,由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,,從微電極引出的微小離子電流通過(guò)高分辨,、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析處理,。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接,,并能通過(guò)特定的記錄 儀器 反映這些變化。膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點(diǎn)的分析,。嘉興細(xì)胞生物學(xué)腦定位膜片鉗網(wǎng)站膜片鉗記錄的幾種形式:細(xì)...
膜片鉗技術(shù)與其他生物檢測(cè)技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用:1.膜片鉗與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合應(yīng)用:利用激光掃描共聚焦顯微鏡,、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術(shù)可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)成像研究,,將膜片鉗技術(shù)與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合使用不但可以檢測(cè)細(xì)胞的電流變化情況,,而且還可以對(duì)細(xì)胞的電信號(hào)傳遞活動(dòng)進(jìn)行成像觀察。2.膜片鉗與原子力顯微鏡結(jié)合應(yīng)用:將膜片鉗和AFM結(jié)合使用的技術(shù)可以提高細(xì)胞電生理檢測(cè)的分辨率和靈敏度,;而且,,在獲得細(xì)胞電生理信息的同時(shí),還能獲取細(xì)胞的生物力學(xué)性質(zhì),,從而更很全地研究細(xì)胞的生理功能,。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):藥液交換迅速。細(xì)胞內(nèi),、外液的交換是在平面芯片上進(jìn)行,。上海藥理學(xué)電生理膜片鉗哪家好膜片鉗芯片技術(shù)是繼...
膜片鉗技術(shù)在通道研究中的重要作用:1.與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道:心肌細(xì)胞通過(guò)各種離子通道對(duì)膜電位和動(dòng)作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能,。近年來(lái),國(guó)外學(xué)者在人類心肌細(xì)胞離子通道特性的研究中取得了許多進(jìn)展,,使得心肌藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)由動(dòng)物細(xì)胞模型向人心肌細(xì)胞成為可能,。2.對(duì)離子通道生理與病理情況下作用機(jī)制的研究:通過(guò)對(duì)各種生理或病理情況下細(xì)胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過(guò)程中的作用機(jī)制,。膜片鉗使用操作注意:封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道,。東莞醫(yī)學(xué)實(shí)用膜片鉗網(wǎng)站膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn):又由于玻璃微電極管徑很小,其下膜面積光約1 μm2,,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,,一般...
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)只適用于藥物的初篩和二次篩選,且對(duì)樣本有很高的選擇性,,而傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)可適用于各種樣本,,應(yīng)用范圍廣,能夠分析檢測(cè)所有的離子通道類型,,同時(shí)能夠分析離子通道的動(dòng)力學(xué)特征,。因此目前,傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)仍然是不可替代的,。在進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)時(shí),,玻璃電極給負(fù)壓并吸住細(xì)胞,形成高阻封接,,破膜,,給藥,記錄數(shù)據(jù)的過(guò)程,,都需要細(xì)胞保持比較好的活性狀態(tài),,才能更加高效的獲得有效數(shù)據(jù)。因此細(xì)胞的穩(wěn)定性就成了評(píng)估樣品好壞的關(guān)鍵,。膜片鉗芯片技術(shù)是繼細(xì)胞芯片之后的又一種嶄新的分析細(xì)胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù).由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準(zhǔn)確性特點(diǎn)外,還具有高通量,、自動(dòng)化以及細(xì)胞多通道參數(shù)和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)...
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):1.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時(shí)切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進(jìn)入銀絲底部增加噪聲,。2.安裝玻璃微電極時(shí),,電極應(yīng)與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極,。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑,。4.換液時(shí)應(yīng)時(shí)刻觀察浴槽,,防止液面過(guò)低或液體溢出污染鏡頭,很適液面為微高于出液口,。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請(qǐng)及時(shí)清洗,,防止長(zhǎng)菌影響實(shí)驗(yàn)。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實(shí)驗(yàn),。7.干燥季節(jié)請(qǐng)先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電,。8.每位實(shí)驗(yàn)者請(qǐng)?jiān)贓盤(pán)建立自己的文件夾儲(chǔ)存數(shù)據(jù)。膜片鉗的應(yīng)用:與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道,。嘉興細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄服務(wù)膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):1....
電壓鉗與膜片鉗有什么區(qū)別,?電壓鉗技術(shù)是通過(guò)向細(xì)胞內(nèi)注射一定的電流,抵消離子通道開(kāi)放時(shí)所產(chǎn)生的離子流,,從而將細(xì)胞膜電位固定在某一數(shù)值,。由于注射電流的大小與離子流的大小相等、方向相反,,因此它可以反映離子流的大小和方向,。膜片鉗技術(shù)鉗制的是膜片,是指采用尖銳端經(jīng)過(guò)處理的微電極與細(xì)胞膜發(fā)生緊密接觸,,使尖銳端下的這片細(xì)胞膜在電學(xué)上與其它細(xì)胞膜分離,,這很大程度降低了背景噪聲,使單通道微弱的電流得以分辨出來(lái),。采用電壓鉗技術(shù)將這片膜的電位鉗制在某一數(shù)值,,可記錄到單通道電流。從這點(diǎn)上看,,膜片鉗技術(shù)是特殊的電壓鉗技術(shù),。隨著膜片鉗技術(shù)的發(fā)展,它已經(jīng)不只只局限于膜片的概念,,也不只只采用電壓鉗技術(shù),,還常采用電流鉗技術(shù)。膜...
膜片鉗技術(shù)被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”,。是研究離子通道的較重要的技術(shù),。目前膜片鉗技術(shù)已從常規(guī)膜片鉗技術(shù)(Conventionalpatchclamptechnique)發(fā)展到全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)(Automatedpatchclamptechnique)。傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)每次只能記錄一個(gè)細(xì)胞(或一對(duì)細(xì)胞),,對(duì)實(shí)驗(yàn)人員來(lái)說(shuō)是一項(xiàng)耗時(shí)耗力的工作,,它不適合在藥物開(kāi)發(fā)初期和中期進(jìn)行大量化合物的篩選,也不適合需要記錄大量細(xì)胞的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究,。全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)的出現(xiàn)在很大程度上解決了這些問(wèn)題,,它不只通量高,一次能記錄幾個(gè)甚至幾十個(gè)細(xì)胞,,而且從找細(xì)胞,、形成封接、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化,免除了這些操作的復(fù)雜...
全自動(dòng)膜片鉗的優(yōu)勢(shì):自動(dòng)化:抓取細(xì)胞,、形成封接,、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作全部自動(dòng)化,極大的節(jié)約實(shí)驗(yàn)人員的時(shí)間精力,。簡(jiǎn)約化:傳統(tǒng)膜片鉗所需要的顯微鏡,、顯微操作系統(tǒng)、微電極拉制儀,,防震臺(tái),、屏蔽網(wǎng)等全都不需要。效率高:是傳統(tǒng)膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的5-10倍,??煽啃裕簩?shí)驗(yàn)結(jié)果輕松復(fù)制。經(jīng)濟(jì)實(shí)惠:藥物消耗低,,每次實(shí)驗(yàn)記錄較低只需5μl內(nèi)外液體,。零技術(shù)門(mén)檻:無(wú)需膜片鉗操作經(jīng)驗(yàn),輕松上手,。高芯片封接:封接電阻可達(dá)1GΩ,。確保實(shí)驗(yàn)可靠性。兼容性強(qiáng):可與市場(chǎng)上大多數(shù)放大器兼容,。應(yīng)用范圍廣:除擁有傳統(tǒng)膜片鉗功能外,,還可以對(duì)手動(dòng)膜片鉗無(wú)法涉及的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行記錄。擴(kuò)展功能多:配套擴(kuò)展設(shè)備豐富,,如內(nèi)灌流系統(tǒng),、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體...
膜片鉗的應(yīng)用:在心血管藥理研究中的應(yīng)用:隨著膜片鉗技術(shù)在心血管方面的普遍應(yīng)用,,對(duì)血管疾病和藥物作用的認(rèn)識(shí)不只得到了不斷更新,,而且在其病因?qū)W與藥理學(xué)方面還形成了許多新的觀點(diǎn)。正如諾貝爾基金會(huì)在頒獎(jiǎng)時(shí)所說(shuō):“Neher和Sadmann的貢獻(xiàn)有利于了解不同疾病機(jī)理,,為研制新的更為有效的藥物開(kāi)辟了道路”,。創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選:在離子通道高通量篩選中主要是進(jìn)行樣品量大、篩選速度占優(yōu)勢(shì),、信息量要求不太高的初級(jí)篩選,。較近幾年,分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎(chǔ)的兩大主流技術(shù)市場(chǎng),。將電生理研究信息量大,、靈敏度高等特點(diǎn)與自動(dòng)化、微量化技術(shù)相結(jié)合,,產(chǎn)生了自動(dòng)化膜片鉗等一些新技術(shù),。用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨...
膜片鉗技術(shù)是通過(guò)微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,,在電學(xué)上分隔和電極尖開(kāi)口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域(膜片)以及其周圍,,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,對(duì)這膜片上的離子通道的離子電流(pA級(jí))進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄的方法,。測(cè)量回路的中心部分是使用場(chǎng)效應(yīng)管運(yùn)算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器,。當(dāng)場(chǎng)效應(yīng)管運(yùn)算放大器的正負(fù)輸入端子是等電位,,向正輸入端子施加指令電位時(shí),,因?yàn)槎搪坟?fù)端子以及膜片都可等電位地達(dá)到鉗制的作用,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時(shí),,其間達(dá)到Z小的分流電流,。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):向玻璃微電極灌注內(nèi)液時(shí)切勿灌太多,以防液體進(jìn)入銀絲底部增加噪聲,。莆田全自動(dòng)電生理膜片鉗網(wǎng)...
膜片鉗系統(tǒng)有如下應(yīng)用局限性(1)光能應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的紀(jì)錄,,因此大部分的紀(jì)錄對(duì)象為化細(xì)胞,,而對(duì)于需要貼壁生長(zhǎng)的大多數(shù)正常細(xì)胞,,現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)就無(wú)法紀(jì)錄,;(2)在紀(jì)錄對(duì)象上,目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀(jì)錄胞膜形狀平整飽滿的細(xì)胞,,大部分是工具細(xì)胞如化細(xì)胞,,此類細(xì)胞有比較強(qiáng)的細(xì)胞膜可以禁得起各種人為操作,,而許多具有研究?jī)r(jià)值的細(xì)胞(例如元代培養(yǎng)的神經(jīng)元)胞膜較弱容易破裂,,且胞體表面不規(guī)整,,現(xiàn)有的自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場(chǎng),。膜片鉗使用操作注意:實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的水電,,檢查實(shí)驗(yàn)室門(mén)窗,。莆田醫(yī)學(xué)離子通道方案膜片鉗使用的注意事項(xiàng):工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易...
膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn):膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同,;②電位固定的細(xì)胞膜面積不同,,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過(guò)保持細(xì)胞跨膜電位不變,,并迅速控制其數(shù)值,,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況,。因此只能用來(lái)研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng),。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究,,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):外灌流時(shí)間常數(shù):~200ms,;內(nèi)灌流時(shí)間常數(shù):~2s,。莆田細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗實(shí)驗(yàn)應(yīng)用膜片鉗實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞膜型:一個(gè)完整的細(xì)胞膜電學(xué)模型包含幾個(gè)基本...
膜片鉗實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞膜型:一個(gè)完整的細(xì)胞膜電學(xué)模型包含幾個(gè)基本組分:膜電容,膜電阻和膜電勢(shì),。這三個(gè)電學(xué)組分形成的原因各不相同:1,、膜電容(membranecapacitance,Cm)的形成是由于生物膜為磷脂雙分子層,對(duì)離子和其他水溶性物質(zhì)均不通透,,遂使細(xì)胞膜成為了電的不良導(dǎo)體,,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞外液-磷脂雙分子層-細(xì)胞內(nèi)液構(gòu)成了細(xì)胞膜電容。Cm的大小與細(xì)胞膜表面積成正比,,與磷脂雙分層的厚度成反比,。膜電容在這里的作用,主要為完成細(xì)胞的充放電過(guò)程,。2,、膜電阻(membraneresistance,Rm)的形成是由于細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)通道,也就是離子通道的存在,。離子和小的極性分子只有通過(guò)通道才能進(jìn)出細(xì)胞膜,,因...
膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的優(yōu)點(diǎn):與傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)記錄相比,全細(xì)胞記錄也有很多好處,,比如電極尖銳端開(kāi)口較大,,電阻只2~20MΩ,易于進(jìn)行電壓/電流鉗制,,噪聲很大程度下降,,電極電壓降也變得很小,補(bǔ)償非常容易,。與單通道記錄相比,,單通道記錄無(wú)法獲得整個(gè)細(xì)胞的功能變化信息,而全細(xì)胞記錄(尤其是腦片或在體記錄)所獲信息則能反映細(xì)胞功能(甚至細(xì)胞之間信息傳遞)的改變,,加之易于更換細(xì)胞外液,,所以,全細(xì)胞記錄更適用于對(duì)離子通道的藥理學(xué)研究,,即加各種通道blocker啦,,激動(dòng)劑啦之類的。膜片鉗使用操作注意:禁止私拉電線,,如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通,。廣州全自動(dòng)膜片鉗電生理技術(shù)網(wǎng)站一種提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法與流程:膜...
膜片鉗實(shí)驗(yàn)中電極制備之分兩次拉制,,首先次拉長(zhǎng)7~10mm,直徑小于200μm,,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行第二次拉制,,較終使尖銳端的直徑為1~2μm,兩步拉制的目的主要是使電極前端的錐度變大,,狹窄部長(zhǎng)度縮短,,因此可降低電極的串聯(lián)電阻,也可減少全細(xì)胞記錄時(shí)的電極液透析時(shí)間,。由于膜片微電極較忌沾染灰塵和臟物,,更忌觸碰尖銳端附近部位,所以一般要求在使用前制作,。拋光:將電極固定于顯微鏡工作臺(tái)上,,在鏡下將尖銳端靠近加熱絲,當(dāng)通電加熱時(shí),,可見(jiàn)電極尖銳端微微回縮,此時(shí)電極變得光滑,,且尖銳端的雜質(zhì)燒去,,得到較干凈的表面。從而有利于和細(xì)胞膜緊密封接,,并在封接后更易保持穩(wěn)定,。膜片鉗技術(shù)是用來(lái)研究單個(gè)離體的活細(xì)胞、組織切片或細(xì)胞...
膜片鉗實(shí)驗(yàn)中電極制備之分兩次拉制,,首先次拉長(zhǎng)7~10mm,,直徑小于200μm,在此基礎(chǔ)上進(jìn)行第二次拉制,,較終使尖銳端的直徑為1~2μm,,兩步拉制的目的主要是使電極前端的錐度變大,狹窄部長(zhǎng)度縮短,,因此可降低電極的串聯(lián)電阻,,也可減少全細(xì)胞記錄時(shí)的電極液透析時(shí)間。由于膜片微電極較忌沾染灰塵和臟物,,更忌觸碰尖銳端附近部位,,所以一般要求在使用前制作。拋光:將電極固定于顯微鏡工作臺(tái)上,,在鏡下將尖銳端靠近加熱絲,,當(dāng)通電加熱時(shí),可見(jiàn)電極尖銳端微微回縮,,此時(shí)電極變得光滑,,且尖銳端的雜質(zhì)燒去,,得到較干凈的表面。從而有利于和細(xì)胞膜緊密封接,,并在封接后更易保持穩(wěn)定,。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對(duì)離子通道生理與病理作用機(jī)制的...
一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測(cè)量在不同藥物對(duì)細(xì)胞中的離子通道的影響,通常需要在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中實(shí)施灌流,。例如,,需要檢驗(yàn)?zāi)撤N是否對(duì)某種離子通道的影響,則需要在細(xì)胞封接后記錄電流數(shù)據(jù),,然后通過(guò)在細(xì)胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對(duì)比數(shù)據(jù)判斷該對(duì)離子通道的影響,。以往多采用橡皮泥等簡(jiǎn)單設(shè)備固定灌流管進(jìn)行實(shí)驗(yàn),經(jīng)常出現(xiàn)灌流管固定不良影響實(shí)驗(yàn)的情況,,也有精密的灌流裝置,,但是結(jié)構(gòu)復(fù)雜,且成本非常高,。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):在放大器打開(kāi)時(shí)不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲,。寧波藥理學(xué)膜片鉗成像哪家好膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉...
膜片鉗技術(shù)是通過(guò)微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學(xué)上分隔和電極尖開(kāi)口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域(膜片)以及其周圍,,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,,對(duì)這膜片上的離子通道的離子電流(pA級(jí))進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄的方法。測(cè)量回路的中心部分是使用場(chǎng)效應(yīng)管運(yùn)算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器,。當(dāng)場(chǎng)效應(yīng)管運(yùn)算放大器的正負(fù)輸入端子是等電位,,向正輸入端子施加指令電位時(shí),因?yàn)槎搪坟?fù)端子以及膜片都可等電位地達(dá)到鉗制的作用,,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時(shí),,其間達(dá)到很小的分流電流。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:通過(guò)滲透很快改變胞漿成分并達(dá)到平衡,。莆田全自動(dòng)膜片鉗電生理技術(shù)網(wǎng)站一種電生理膜片鉗灌流裝...
一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測(cè)量在不同藥物對(duì)細(xì)胞中的離子通道的影響,,通常都需要在膜片鉗實(shí)驗(yàn)中實(shí)施灌流。例如,,需要檢驗(yàn)?zāi)撤N是否對(duì)某種離子通道的影響,,則需要在細(xì)胞封接后記錄電流數(shù)據(jù),然后通過(guò)在細(xì)胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對(duì)比數(shù)據(jù)判斷該對(duì)離子通道的影響,。以往多采用橡皮泥等簡(jiǎn)單設(shè)備固定灌流管進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,經(jīng)常出現(xiàn)灌流管固定不良影響實(shí)驗(yàn)的情況,也有精密的灌流裝置,,但是結(jié)構(gòu)復(fù)雜,,且成本非常高,。膜片鉗使用操作注意:用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作,。徐州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗成像應(yīng)用膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)流程之電機(jī)制備和實(shí)驗(yàn)的記錄和分析數(shù)據(jù):電極制備:膜片微電極是將玻璃毛細(xì)管...
膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)只適用于藥物的初篩和二次篩選,,且對(duì)樣本有很高的選擇性,而傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)可適用于各種樣本,,應(yīng)用范圍廣,,能夠分析檢測(cè)所有的離子通道類型,同時(shí)能夠分析離子通道的動(dòng)力學(xué)特征,。因此目前,,傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)仍然是不可替代的。在進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)時(shí),,玻璃電極給負(fù)壓并吸住細(xì)胞,,形成高阻封接,破膜,,給藥,,記錄數(shù)據(jù)的過(guò)程,都需要細(xì)胞保持比較好的活性狀態(tài),,才能更加高效的獲得有效數(shù)據(jù),。因此細(xì)胞的穩(wěn)定性就成了評(píng)估樣品好壞的關(guān)鍵。膜片鉗芯片技術(shù)是繼細(xì)胞芯片之后的又一種嶄新的分析細(xì)胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù).由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準(zhǔn)確性特點(diǎn)外,還具有高通量,、自動(dòng)化以及細(xì)胞多通道參數(shù)和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)...
膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn):膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同,;②電位固定的細(xì)胞膜面積不同,,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過(guò)保持細(xì)胞跨膜電位不變,,并迅速控制其數(shù)值,,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來(lái)研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng),。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究,,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)發(fā)展起來(lái)的,,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時(shí)間上固定于某一測(cè)定值,。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):軟件的功能全部,可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案...
膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn):膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同,;②電位固定的細(xì)胞膜面積不同,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同,。電壓鉗技術(shù)主要是通過(guò)保持細(xì)胞跨膜電位不變,,并迅速控制其數(shù)值,,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來(lái)研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng),。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究,,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)發(fā)展起來(lái)的,,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時(shí)間上固定于某一測(cè)定值,。膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇。福州全自動(dòng)離子通道服務(wù)膜片鉗的數(shù)據(jù)...