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南京Protein AG免疫沉淀實驗原理

來源: 發(fā)布時間:2025-03-27

免疫沉淀(Immunoprecipitation,,IP)是一種廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)和生物化學(xué)實驗中的技術(shù),,主要用于從復(fù)雜混合物中分離和富集特定的目標蛋白或多肽。該技術(shù)基于抗原與抗體之間的特異性結(jié)合,,通過抗體與目標蛋白的結(jié)合,,再利用固相載體(如瓊脂糖珠或磁珠)將抗原-抗體復(fù)合物從溶液中分離出來。免疫沉淀技術(shù)不僅可用于蛋白質(zhì)的純化,,還可用于研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,、蛋白質(zhì)翻譯后修飾以及蛋白質(zhì)功能分析等領(lǐng)域。免疫沉淀的基本步驟包括樣品制備,、抗體孵育,、復(fù)合物捕獲和洗脫。免疫沉淀操作中,,合適抗體的選擇是決定能否成功捕獲目標抗原的重要前提,。南京Protein AG免疫沉淀實驗原理

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之后加入 Protein A/G 珠子,再次孵育,,使抗原 - 抗體復(fù)合物與珠子結(jié)合,。通過離心或磁力分離,將結(jié)合有蛋白質(zhì)復(fù)合物的珠子收集起來,,隨后進行多次洗滌,,去除未結(jié)合的雜質(zhì)。洗滌過程中,,洗滌液的成分和洗滌次數(shù)同樣影響著實驗結(jié)果的純度和特異性,。,使用洗脫液將蛋白質(zhì)復(fù)合物從珠子上洗脫下來,,用于后續(xù)的分析,。Co-IP 免疫沉淀在生命科學(xué)研究的多個領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在信號傳導(dǎo)通路研究中,,通過 Co-IP 免疫沉淀可以鑒定出參與同一信號通路的蛋白質(zhì),,明確它們之間的上下游關(guān)系,從而構(gòu)建完整的信號傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò),。上海anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠的選擇利用 Protein A/G 免疫沉淀,,可深入探究蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)的功能與相互作用。

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例如在研究腫瘤細胞的增殖信號通路時,,科研人員可以以某個關(guān)鍵的信號蛋白為誘餌,,利用 Co-IP 免疫沉淀找出與之相互作用的其他蛋白,揭示腫瘤細胞異常增殖的分子機制。在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域,,Co-IP 免疫沉淀可用于研究神經(jīng)元中蛋白質(zhì)的相互作用,,了解神經(jīng)遞質(zhì)釋放、突觸可塑性等過程的分子基礎(chǔ),。雖然 Co-IP 免疫沉淀技術(shù)有著諸多優(yōu)勢,,如能夠在接近生理條件下研究蛋白質(zhì)相互作用,,結(jié)果更具生理相關(guān)性,;可以同時檢測多個蛋白質(zhì)之間的相互作用,有助于發(fā)現(xiàn)新的蛋白質(zhì)復(fù)合物,。

我們向裂解液中加入針對某個已知蛋白(誘餌蛋白)的特異性抗體,,抗體與誘餌蛋白結(jié)合形成抗原 - 抗體復(fù)合物。如同 IP 免疫沉淀一樣,,借助 Protein A/G 磁珠或瓊脂糖珠等固相載體,,將抗原 - 抗體復(fù)合物從復(fù)雜的裂解液中分離出來。此時,,與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白質(zhì)(獵物蛋白)也會隨著誘餌蛋白一起被沉淀下來,,從而實現(xiàn)對蛋白質(zhì)復(fù)合物的富集和分析,幫助我們了解細胞內(nèi)蛋白質(zhì)之間的相互作用關(guān)系,。實驗流程上,,首先同樣是細胞或組織的裂解。免疫共沉淀(Co-IP)是研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,,揭示分子網(wǎng)絡(luò),。

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免疫沉淀技術(shù)自誕生以來,便在生命科學(xué)研究領(lǐng)域扮演著舉足輕重的角色,。早期的免疫沉淀技術(shù)較為簡單,,主要依賴于抗原抗體的基本結(jié)合原理。隨著研究的深入,,科研人員不斷優(yōu)化,,使得這一技術(shù)逐漸成熟。如今,,它已成為研究生物分子相互作用的重要手段,。免疫沉淀的原理基于抗原與抗體的特異性識別。在復(fù)雜的生物樣本中,,抗體如同 “精確制導(dǎo)武器”,,能靶向結(jié)合目標抗原,形成穩(wěn)定的抗原 - 抗體復(fù)合物,。再利用固相載體的特性,,將復(fù)合物從樣本中分離出來,從而實現(xiàn)對目標分子的富集與分析。免疫沉淀搭配其他技術(shù),,如 western blot,,可對目標蛋白定性定量,豐富研究維度,。杭州免疫沉淀磁珠多少錢

通過免疫共沉淀(Co-IP),,可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)。南京Protein AG免疫沉淀實驗原理

免疫沉淀技術(shù)的成功關(guān)鍵在于抗體的選擇和質(zhì)量,。高特異性和高親和力的抗體能夠顯著提高目標蛋白的富集效率,,并減少非特異性結(jié)合的干擾。此外,,實驗條件的優(yōu)化(如緩沖液成分,、孵育時間和溫度)也對實驗結(jié)果有重要影響。為了確保實驗的可靠性,,通常會設(shè)置陰性對照(如使用非特異性抗體)以排除非特異性結(jié)合的干擾,。免疫沉淀技術(shù)的應(yīng)用非常。例如,,在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究中,,免疫沉淀可以與質(zhì)譜聯(lián)用(Co-IP/MS)來鑒定與目標蛋白相互作用的蛋白網(wǎng)絡(luò)。南京Protein AG免疫沉淀實驗原理