微滴),,包含一個或多個拷貝的核酸分子(也就是說我們所說的DNA模板),,這是與PCR或qPCR反應(yīng)的區(qū)別,PCR或qPCR只在一個反應(yīng)體系中進行,,而數(shù)字PCR在每個反應(yīng)單元(微滴)中都會對目標(biāo)分子進行擴增,,擴增結(jié)束后統(tǒng)計熒光信號并分析,。數(shù)字PCR檢測其實離我們越來越近,下面我們以幾個臨床案例研究來舉例,,展示數(shù)字PCR巨大的臨床應(yīng)用前景,。1).個體化診療通過檢測T790M位點突變情況,可以更好地評估一代TKI藥物的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用,。然而,,由于qPCR平臺ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的檢測到T790M突變,。這個時候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了****的檢測精度,,此外,dPCR定量的優(yōu)勢也能充分發(fā)揮出來了,,可以監(jiān)控突變含量變化,,做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。2.)基因表達分析伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細(xì)胞白血?。–ML)患者延長生存期,,但是臨床上發(fā)現(xiàn),伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達量有很大的關(guān)系,。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行測定,,結(jié)果檢測下限可以達到,顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優(yōu)勢[2],。 PCR儀是分子生物學(xué)相關(guān)實驗的常規(guī)儀器,。上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
談?wù)剶?shù)字PCR那些事數(shù)字PCR即DigitalPCR(dPCR),它是一種核酸分子定量技術(shù)。相較于qPCR,,數(shù)字PCR可讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),,是對起始樣品的定量。1,、PCR之?dāng)?shù)字PCR技術(shù)發(fā)展歷程在定量PCR時,,我們常常糾結(jié)一個問題,究竟是相對定量還是定量呢,?如今,,你無需糾結(jié)了,因為數(shù)字PCR(digitalPCR)來了,。盡管這兩種技術(shù)有些類似,,都是估計起始樣品中的核酸量,但它們有一個重要的區(qū)別,。定量PCR是依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來測定核酸量,,而數(shù)字PCR則讓你能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù),是對起始樣品的定量,。因此特別適用于依靠Ct值不能很好分辨的應(yīng)用領(lǐng)域:拷貝數(shù)變異,、突變檢測、基因相對表達研究(如等位基因不平衡表達),、二代測序結(jié)果驗證,、miRNA表達分析、單細(xì)胞基因表達分析等,。Nacia數(shù)字PCR2,、數(shù)字PCR之dPCR檢測原理數(shù)字PCR即DigitalPCR(dPCR)是這幾年才迅速發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù),雖然出生的晚,,但是潛力不小,,因為數(shù)字PCR解決了qPCR這么多年懸而未決的問題,那就是不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量并且可以將檢測靈敏度提高至單個核酸分子,。那它是怎么做到的呢,?這要從它的檢測原理說起。Nacia數(shù)字PCR數(shù)字PCR通過將一個樣本分成幾十到幾萬份,,分配到不同的反應(yīng)單元,。 上海力康實時熒光PCR儀生產(chǎn)廠家DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。
血友病是一組**為常見的遺傳性凝血障礙,,根據(jù)因子缺陷的不同分為甲,、乙兩型,(Ⅷ,、Ⅸ因子缺陷),,也有復(fù)合型血友病,,但不常見。甲型血友病發(fā)病率為1/10000,,Ⅷ因子基因位于G6PD基因附近,,全長186Kb,大范圍的基因重排(缺失,、插入,、重復(fù))導(dǎo)致甲型血友病的病例很少,*為Ⅷ因子缺陷的5%,,大部分病人表現(xiàn)為單個或少數(shù)堿基的突變,。由于Ⅷ因子基因長度為186Kb,突變位點多,,而且新生突變頻率高,從臨床角度講不能對每一個突變都檢測,,可對**為常見的幾種突變類型進行檢測,,主要的檢測手段是PCR結(jié)合RELP分析。乙型血友病發(fā)病率占血友病的20%,,其基因變化及檢測方法與甲型血友病類似,。區(qū)別雄性及雌性的物質(zhì)基礎(chǔ)是性染色體,哺乳動物胚胎發(fā)育中,,雌性表型不需要任何調(diào)節(jié),,而雄性表型則由多因素決定,位于Y染色體上的指導(dǎo)雄性性別分ss化的基因命名為睪丸決定因子(TDF)?,F(xiàn)代研究表明,,SRY(Sex-determiningregionofYchromosome)基因是TDF基因,位于Y染以體短臂末端,。SRY區(qū)缺失易導(dǎo)致46XY核型個體發(fā)育成女性,。進行基因檢測可以檢出SRY基因組的易位及缺失,從而診斷性別發(fā)育異常,,這一探索性別異常的研究非常熱門,。另外還有一種46XY核型異常的病人即睪丸女性化,這是用于雄***受體,。
移動箱式PCR實驗室嚴(yán)格按照生物安全實驗室的標(biāo)準(zhǔn)建造,,配備有各類儀器設(shè)備,注重保障實驗人員安全,,同時具備機動靈活,、反應(yīng)迅速等特點,協(xié)助前線醫(yī)院開展檢測工作,,為防控奉獻綿薄之力,。由于集裝箱在出廠前已經(jīng)完成了單個箱體里面配置的所有安裝,,水、電,、風(fēng),、廢水和廢氣排放等系統(tǒng)已經(jīng)在箱體配備,同時保證了外面環(huán)境的安全,。在現(xiàn)場基礎(chǔ)平整的條件下,,只需要簡單的進行箱體吊裝安放、給水和用電對接即可——在極端情況下甚至可以在無水無電的情況下短時運行,,真正做到組裝迅速,。對接安裝本身不需要非常專業(yè)的人員,常規(guī)的疾控維修人員或工程人員就可以完成對接,。箱體安放位置一般在室外,,對于病人的隔離或控制病毒擴散都是有利的。室外空氣流通快,,不會像室內(nèi)空氣那樣高度聚集及停留產(chǎn)生氣溶膠導(dǎo)致病毒擴散的風(fēng)險加大,,箱式PCR實驗室有效的避免了聚集性和傳染性,當(dāng)箱式PCR實驗室內(nèi)部環(huán)境受到污染時,,可以快速通過送排風(fēng)系統(tǒng)置換新鮮的空氣達到實驗室凈化的要求,。箱式PCR實驗室可以重復(fù)使用,當(dāng)結(jié)束以后,,經(jīng)過專業(yè)人員的消毒,,可以重新運到疾控中心、醫(yī)院,、港口或者第三方檢測等單位再次使用,,也可經(jīng)過專業(yè)存放和維護,待需要時重新投入使用,。PCR實驗室又叫“基因擴增實驗室”,,根據(jù)規(guī)定需有生物安全柜等防護設(shè)備及熒光定量PCR儀等檢測設(shè)備。
力康GM05智能梯度基因擴增儀(控溫儀),,基于WindowsCE智能化操作系統(tǒng),,具備多達100余項故障自診斷功能。 連接互聯(lián)網(wǎng),,用戶可通過IE瀏覽器登錄力康官網(wǎng)的下載中心進行版本更新,,完成PCR儀的遠(yuǎn)程維護、診斷和數(shù)據(jù)交換,, 提高了工作效率,。GM05智能梯度基因擴增儀(控溫儀)支持觸摸和鼠標(biāo)操作,可外接移動U盤,,打破傳統(tǒng)PCR儀的按鍵式操作模式,,使得編寫程序及操作更加靈活方便,。GM05智能梯度基因擴增儀(控溫儀)率先在行業(yè)領(lǐng)域引入物聯(lián)網(wǎng)概念,具備新一代的信息技術(shù),,以互聯(lián)網(wǎng)為基礎(chǔ),,實現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)的延伸與拓展,以一臺上位機(PC)為主機,,可連接多達200臺下位機(GM05智能梯度基因擴增儀/控溫儀),。只要樣本有一個病原體存在,PCR就可以檢測到,。國產(chǎn)實驗室PCR儀價格信息
熒光定量PCR儀是以熒光染料或熒光標(biāo)記探針偵測每次聚合酶鏈鎖反應(yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量,。上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
基本的PCR須具備:1.要被復(fù)制的DNA模板2.界定復(fù)制范圍兩端的引物(四種脫氧核苷酸)及水。利用升溫使DNA變性,,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,,進而達到基因復(fù)制的目的。PCR的設(shè)想核酸研究已有100多年的歷史,,二十世紀(jì)60年代末,、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術(shù),Korana于1971年提出核酸體外擴增的設(shè)想:“經(jīng)過DNA變性,,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,,并不斷重復(fù)該過程便可克隆tRNA基因”,。1985年美國PE-Cetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發(fā)明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應(yīng)。其原理類似于DNA的體內(nèi)復(fù)制,。Mullis使用的DNA聚合酶是大腸桿菌DNA聚合酶I的Klenow片段,,其缺點是:①Klenow酶不耐高溫,90℃會變性失活,,每次循環(huán)都要重新加,。②引物鏈延伸反應(yīng)在37℃下進行,容易發(fā)生模板和引物之間的堿基錯配,,其PCR產(chǎn)物特異性較差,,合成的DN段不均一。此種以Klenow酶催化的PCR技術(shù)雖較傳統(tǒng)的基因擴增具備許多突出的優(yōu)點,,但由于Klenow酶不耐熱,,在DNA模板進行熱變性時,會導(dǎo)致此酶鈍化,,每加入一次酶只能完成一個擴增反應(yīng)周期,,給PCR技術(shù)操作程序添了不少困難。這使得PCR技術(shù)在一段時間內(nèi)沒能引起生物醫(yī)學(xué)界的足夠重視,。 上海力康實驗室PCR儀批發(fā)廠家
力新儀器(上海)有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),,發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大,。公司目前擁有較多的高技術(shù)人才,以不斷增強企業(yè)重點競爭力,,加快企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新,,實現(xiàn)穩(wěn)健生產(chǎn)經(jīng)營。力新儀器(上海)有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋數(shù)字化手術(shù)室,,實驗室儀器,,新生兒科設(shè)備,ICU重癥產(chǎn)品,,堅持“質(zhì)量保證,、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,,贏得廣大客戶的支持和信賴,。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務(wù),我們相信誠實正直,、開拓進取地為公司發(fā)展做正確的事情,,將為公司和個人帶來共同的利益和進步。經(jīng)過幾年的發(fā)展,,已成為數(shù)字化手術(shù)室,,實驗室儀器,新生兒科設(shè)備,,ICU重癥產(chǎn)品行業(yè)出名企業(yè),。