要準(zhǔn)備的器具：組織剪2把,，有齒鑷1把,，無齒鑷1把，200 ml燒杯1個,，培養(yǎng)皿1個,，帶蓋廣口瓶1個，離心管,、小瓶數(shù)個,，滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴(yán)格高壓消毒滅菌,。需配制的液體0.1％醋酸溶液,。經(jīng)44.48N10 min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75％酒精溶液,。取大鼠尾巴,，洗凈,，置75%酒精浸泡消毒后,，手持尾巴，用止血鉗夾住尾巴較高,，折斷尾骨后拉出尾腱,，將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中，稱尾腱的重量,，按每克尾腱50ml 的比例加入0.1%醋酸溶液,，搖晃，使尾腱分散于醋酸溶液中,，4℃放置48 小時,，離心。吸取其上清,，分裝至小瓶,，4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成。放上小玻片,，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中,。杭州珠海鼠尾膠原

具體實施方式實施例1 止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇,、殼聚糖作為輔料,。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?0.2% 0.2%。余量為水,。2,、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)小板，-40°C預(yù)凍池,，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍4h,，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥10h，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料,。Co60輻射滅菌,，干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血,。實施例2 止血材料的制備1,、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料,。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%,，余量為水。2,、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)板,，-20°C預(yù)凍，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍8h,，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥30h,，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌,，干燥保存,。南昌鼠尾膠原生產(chǎn)廠家使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法,。各個材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水,，采用冷凍干燥工藝制備。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備,，較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收,、容易引起機(jī)體過敏、止血效果差等缺點(diǎn),，本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收,，生物相容性好,；止血效果快，具有很強(qiáng)的親水性,；同時可啟動血小板的凝聚,，一旦血小板凝聚，就可形成血栓,，進(jìn)而促使血漿結(jié)塊阻止血流,。同時，膠原表面的特定區(qū)域可以與細(xì)胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合,，可以起到防止腸粘連的功效,。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心，簡化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過程中,，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌,、無菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料,。膠原蛋白是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理，收集上清液,；在冰水浴中,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物，成透明澄清黏稠溶液,；在冰水浴中,，調(diào)節(jié)pH = 6.5,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時,，去除上清液，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀。按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。無錫鼠尾膠原單價

加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,。杭州珠海鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,，這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。 在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。杭州珠海鼠尾膠原