鼠尾膠原備用膠凝程序：1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白I、無菌10×PBS、無菌蒸餾水,、無菌1MNaOH。2）確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟,。4.1加入10×PBS（終體積/10）mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積（不要添加到管中直到步驟4.6為止）終體積x終膠原蛋白I濃度（mg/mL）,。4.3向10×PBS溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL的無菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：添加蒸餾水體積=V（終）—V（膠原蛋白）—V(10×PBS）—V（1MNaOH）4.5混合管中的物質并放入冰中,。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,，混勻，冰上備用,。5）膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時,。6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。鄭州鼠尾膠原進貨價

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細胞前用無菌的水漂洗。溫州天津鼠尾膠原膠原蛋白（Collagen）是結締組織和內(nèi)臟部位外基質的主要成分,。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成,。在人的身體中這是皮膚、筋,、軟骨,、骨骼及結締組織的較主要的蛋白質。膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一,，不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸，有脯氨酸和羥脯氨酸,。根據(jù)其遺傳分子結構遺傳基因的差別,，膠原蛋白分為20幾個亞型。但較為常見的為Ι,、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白，即間質膠原蛋白,。其中I型較為豐富且品質優(yōu)良,。I型膠原蛋白分布非常普遍，是主纖維束的主要成分,，給結締組織以強度,；是較豐富的膠原蛋白類型，尤其是在皮膚真皮,、骨,、筋和腱中。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡。B．含細胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結）,，立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,，加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,，轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項型在室溫下pH中性時可迅速成膠,，在操作過程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rattailtendoncollagentypeI）根據(jù)Birkedal-Hansen方法，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得。鼠尾膠原,、多聚賴氨酸和明膠3種基質對體外培養(yǎng)角膜上皮細胞增殖的影響,。

I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法，經(jīng)過乙酸抽提,、離心,、滅菌,、透析等步驟制備得到的高純度,、高活性膠原蛋白，屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品,，可用于包被細胞培養(yǎng)器皿（單分子層包被）,，適合多種類型細胞的貼壁如肝臟細胞、神經(jīng)節(jié)細胞,、胚胎細胞,、肌細胞、肺細胞,、神經(jīng)鞘細胞等,。I型膠原蛋白包被細胞培養(yǎng)板，規(guī)格為6/24孔板,，表面經(jīng)I型膠原蛋白包被,，可以很好的降低蛋白質的吸附。使用這種細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細胞，可以獲得良好的細胞貼壁率,，細胞增殖速度快,，形態(tài)均一，細胞培養(yǎng)成功率高,。制備鼠尾膠原：吸取上清,，分裝成小瓶，4℃保存,。廣州正規(guī)鼠尾膠原平均價格

膠原蛋白按其應用可以分為食品級,、一般級、醫(yī)藥級,。鄭州鼠尾膠原進貨價

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結），立即混勻,。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試),。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡。鄭州鼠尾膠原進貨價