外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來(lái)的微小囊泡,，直徑約為30-200nm,，密度在1.13-1.21g/ml,，具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),，天然存在于血液,、尿液,、唾液,、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞（免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞、干細(xì)胞),，都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA，Exosome可通過(guò)細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞,，也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA、miRNA,、lncRNA,、circRNA，甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞,，參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng),、血管生成,、凋亡、凝血和廢物處理等生理過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用,，不同細(xì)胞來(lái)源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病,。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,，它可以通過(guò)外泌體從一個(gè)地方轉(zhuǎn)運(yùn)到另外一個(gè)地方行使基因沉默功能。通過(guò)檢測(cè)外泌體中miRNA表達(dá)變化,，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能,。外泌體提取：免疫分離外泌體的原理大多是通過(guò)抗體包被的微球,，特異性結(jié)合外泌體,。廈門(mén)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：1、抽血技巧,。操作要輕柔迅速,。試管可翻轉(zhuǎn)8-10次使樣本與抗凝劑混勻,，避免劇烈搖晃?；靹蚝?，將試管固定垂直放置于離心分離器，在頂部記錄抽血的準(zhǔn)確時(shí)間,，因?yàn)槌檠c離心之間的時(shí)間間隔可能是一個(gè)影響因素,。外泌體在抽血后30分鐘內(nèi)是比較穩(wěn)定的，若時(shí)間過(guò)長(zhǎng)將導(dǎo)致外泌體數(shù)量增加,。血小板極易因抽血時(shí)的物理因素而并釋放出外泌體,，其中包括接觸,、壓力,、切力。2,、抽血時(shí)間,。除了血液黏度，體內(nèi)血液的各項(xiàng)指標(biāo)在1天中變化很大,。生理節(jié)律會(huì)對(duì)血小板的產(chǎn)生很大的影響,。白細(xì)胞的募集和循環(huán)系統(tǒng)中促炎細(xì)胞和細(xì)胞會(huì)隨時(shí)間變化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會(huì)隨時(shí)間變化,。目前尚無(wú)設(shè)計(jì)較好的實(shí)驗(yàn)對(duì)證實(shí)不同時(shí)間血液中外泌體的變化,，故應(yīng)在相同的時(shí)間采集樣本。目前飲食是否會(huì)對(duì)EV產(chǎn)生影響尚未可知,，但是由于脂蛋白可運(yùn)載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類型,、數(shù)量和作用，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時(shí)間進(jìn)行,。南京正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話外泌體的提取方法：密度梯度離心,。

外泌體因諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)而被眾人知曉，也因其作為生命信息傳遞者,，在體液中普遍存在及易獲得性等特點(diǎn)被譽(yù)為液體活檢"新貴",，成為疾病的精確診斷和治病研究的熱點(diǎn)，尤其是在一些病癥研究領(lǐng)域[,。外泌體作為細(xì)胞間通信載體的作用現(xiàn)在已被普遍接受,。外泌體包含胞質(zhì)環(huán)境中富含的DNA，RNA,，蛋白質(zhì)和其它分析物,，研究表明，外泌體中的運(yùn)轉(zhuǎn)RNA和蛋白質(zhì)與一些病癥的生長(zhǎng)密切相關(guān),，有望作為診斷標(biāo)志物,。研究發(fā)現(xiàn)Vps4A是一個(gè)外泌體的重要調(diào)控因子,，與肝病的發(fā)生有著密切的關(guān)系，Vps4A基因的表達(dá)下調(diào)肝病的發(fā)生及轉(zhuǎn)移相關(guān),。通過(guò)microRNA高通量測(cè)序發(fā)現(xiàn)Vps4A基因能導(dǎo)致外泌體分泌肝病相關(guān)的重要microRNA,，與肝病的發(fā)生密切相關(guān)。

外泌體的提取分離：1,、超濾離心,。由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì),，利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,，便可獲得外泌體。超濾離心法簡(jiǎn)單高效,，且不影響外泌體的生物活性,，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。2,、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高,、操作簡(jiǎn)便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以普遍普及,。外泌體提?。旱退匐x心去除細(xì)胞和凋亡碎片。

外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles,，EVs）,，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、乳汁等,，同時(shí)也存在于組織樣本中，如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。腦組織分離方法簡(jiǎn)述：將腦組織剪成薄片,，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化,，經(jīng)水浴、反復(fù)輕輕上下顛倒,，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中，混勻,，置于冰上,。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過(guò)程，包括除雜,、濾膜過(guò)濾,、超離等。較后用PBS重懸外泌體,，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。超離法是常用的外泌體純化手段,，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。石家莊正規(guī)外泌體提取試劑哪里買

外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì)：純化和富集的完整血漿/血清，尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體可用于功能研究,。廈門(mén)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

外泌體相關(guān)miRNA與肺病的診斷：miRNAs是一類含有20～25個(gè)核苷酸的非編碼小RNA,，能夠通過(guò)下調(diào)或壓制靶mRNAs來(lái)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄水平上的基因表達(dá)，目前非編碼RNA被普遍發(fā)現(xiàn)存在于NSCLC患者外泌體中,，參與一些病癥的形成和演化過(guò)程,。單個(gè)miRNA可能通過(guò)壓制性復(fù)合物與多個(gè)mRNA結(jié)合，從而阻滯整個(gè)生物通路,。因此,，外泌體的miRNA具有成為NSCLC標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì)。Chen等在152例肺病患者的研究中初次報(bào)道了循環(huán)游離miRNA的表達(dá),，與75例健康者相比,，發(fā)現(xiàn)了兩種高表達(dá)的miRNA（miR-25和miR-223）。Rabinonowits等對(duì)27例肺病患者和9例健康人的血漿外泌體中12個(gè)miRNA的表達(dá)進(jìn)行了評(píng)估,，結(jié)果顯示,，12個(gè)一些病癥相關(guān)的miRNA*在肺病患者中過(guò)度表達(dá),。Cazzoli等收集了30個(gè)血漿樣本，發(fā)現(xiàn)4種外泌體miRNA（miR-378a,、-379a,、-139-5p、-200b-5p）在肺病患者血清中明顯升高,，用于篩查患者與健康人ROC曲線下面積（AUC）為0.908,。離心除去細(xì)胞器，留取上清,。廈門(mén)外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨