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外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是超速離心法,,這是目前外泌體提取較常用的方法,。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心,,這種操作簡單、省時(shí),,不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,,用此種方法分離到的外泌體純度高,,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),,量少,。四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,,特異性高,、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性,,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn),。五是PS親和法,,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,,獲得的外泌體形態(tài)完整,,純度較高。由于不使用變性劑,,不影響外泌體的生物活性,,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),,表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體,。六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,,應(yīng)用不普遍。外泌體的提取分離:超速離心法(差速離心),。長沙正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
CD47是信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα,,也稱為CD172a)的配體,CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號(hào),,從而壓制吞噬作用,。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖,增強(qiáng)胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體,。合成納米顆粒對(duì)細(xì)胞有一定毒性作用,,但使用外泌體能夠較小化對(duì)細(xì)胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn),,CD47和病基因KRAS驅(qū)動(dòng)的胞飲作用都會(huì)壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,,并增強(qiáng)胰腺病細(xì)胞對(duì)外泌體的特異性。所以,,外泌體的這種特性增強(qiáng)了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,,并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實(shí)驗(yàn)PDAC小鼠模型的總生存期。貴陽外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多,。
外泌體(exosomes)是活細(xì)胞經(jīng)過"內(nèi)吞-融合-外排"等一系列調(diào)控過程而形成的膜性囊泡,來源于晚期核內(nèi)體(也稱為多囊泡體),,直徑約為30-150nm,,密度在1.13-1.21g/ml,天然存在于血液、唾液,、尿液及母乳等體液中,,同時(shí)外泌體也存在于組織和細(xì)胞間隙中。人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體,,人體中大約有1014個(gè)外泌體,,大約平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。外泌體中含有核酸(DNA,、miRNA,、lncRNA、mRNA,、tRF等),、蛋白和脂類,在細(xì)胞間物質(zhì)和信息轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用,,研究表明其在干細(xì)胞,、免疫調(diào)控、瘤轉(zhuǎn)移,、血管生成以及生物標(biāo)志物等領(lǐng)域都發(fā)揮著不可替代的作用
外泌體鑒定:參與生物功能的分子,,如凋亡轉(zhuǎn)接基因2互作蛋白X(ALIX)、一些病癥易感基因101蛋白(TSG101),、熱休克蛋白(HSP70,、HSP90),以及細(xì)胞分泌的特異性蛋白,。外泌體高通量檢測,。外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸,可以運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA等進(jìn)入受體細(xì)胞,,參與細(xì)胞間通訊。不同細(xì)胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同,,可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,,也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病治病。高通量測序,。2.mRNA高通量測序,。芯片(人、小鼠),。芯片(人,、小鼠),。5.蛋白質(zhì)組分析(iTRAQ、TMT,、Label-free),。外泌體提取:根據(jù)外泌體的大小,,從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體,。
外泌體的提取、分離方法:超高速離心法,。常用的是超高速離心法,,該方法是被譽(yù)為分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”,。該方法利用離心力從細(xì)胞培養(yǎng)液或生物流體獲得外泌體,,經(jīng)過400×g、2000×g,、10000×g的低速離心,,除去細(xì)胞及大的細(xì)胞分泌物;較后超高速100000×g離心得到外泌體[12],。超高速離心因操作簡單,,不需要復(fù)雜的技術(shù)支持,并且成本相對(duì)較低而被普遍使用,。但是該方法耗時(shí),、產(chǎn)率低,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型,、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,,其中較主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會(huì)有其他的囊泡,、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體,。外泌體的提取方法:超濾離心。廈門正規(guī)外泌體提取試劑平均價(jià)格
外泌體的提取方法:色譜法,。長沙正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商
1983年,,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,包括血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,,參與細(xì)胞間通訊,,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵長沙正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商