鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過(guò)來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。注意事項(xiàng)型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rattailtendoncollagentypeI）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過(guò)醋酸（HAc）抽提、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,。鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中。徐州濟(jì)南鼠尾膠原

鼠尾膠原凝膠體在皮膚細(xì)胞原代培養(yǎng)中的應(yīng)用：在國(guó)外的藥理,毒理和皮膚病學(xué)的研究領(lǐng)域中已得到的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細(xì)胞的材料和方法r1]實(shí)驗(yàn)材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰蛋白酶,]~DTA,細(xì)胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細(xì)胞的分離和細(xì)胞懸液的制備:2～3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下皮膚后.以消化12h.輕刷表皮面,收集細(xì)胞懸液,加入細(xì)胞培養(yǎng)液.用梯度離心收集細(xì)胞,以3xi0/m]濃度接種平皿.(3)鼠尾膠原凝膠體的制備:具體方法參見(jiàn)文獻(xiàn)c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中30rain,散盡剩余氨氣,。無(wú)錫正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便,。

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過(guò)夜,。在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過(guò)夜,。5．從包被表面除去多余的液體。過(guò)夜干燥,。如果膠原溶液不是無(wú)菌的,，這時(shí)候可以在無(wú)菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過(guò)夜消毒,。在接種細(xì)胞前用無(wú)菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉,。

鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，其特征在于，包括以下步驟:(1)將無(wú)組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,，真空冷凍干燥備用；(2)凍干鼠尾腱經(jīng)低溫凍干粉碎至200?400目,；(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,，鼠尾腱與醋酸的固液比為I克:10mL?I克:120mL，期間不斷攪拌,，防止凍結(jié)成塊,，得到膠原溶脹液；(4)稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,，鼠尾腱與蛋白酶質(zhì)量比為50:I?100:1,，在4°C，48?74小時(shí)酶解,，期間間歇性攪拌,。在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存,，切勿凍存,，有效期一年。

鼠尾膠原蛋白的用途是什么：將尾巴從動(dòng)物身體切除后,，會(huì)冷凍起來(lái),，并提取尾巴里的筋腱。然后,，將筋腱切成小塊,，并在離心處理之前添加到由醋酸和水勾兌而成的混合物中。用這種方法,，能將膠原蛋白從動(dòng)物材料中分離出來(lái),。在食品加工領(lǐng)域，鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中,。它還可以當(dāng)作酸奶,，冰淇淋，果醬和奶油芝士等食品的增稠劑使用。在一些低脂肪食品中,，它用于模仿全脂食品的感覺(jué)和質(zhì)地,。它還用于生產(chǎn)膳食保健品，據(jù)說(shuō)能讓手指甲和皮膚看起來(lái)更好,。此外,，還有基于膠原蛋白的保健品，可用于促進(jìn)關(guān)節(jié)健康,。鼠尾型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,。寧波昆明鼠尾膠原

加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,。徐州濟(jì)南鼠尾膠原

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果,。方法制作鼠尾膠原，觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,，自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用,。結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液,，不宜封接,；有鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁,，易于封接和長(zhǎng)時(shí)間（約8h)的觀察和記錄,。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉,。徐州濟(jì)南鼠尾膠原