細(xì)胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備A.將400ul去核酸酶水加入管中,，震蕩10秒鐘,，溶解脂狀物,。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存,，使用前還需震蕩，,。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞,。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA,，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑,，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘,。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。(5)加入混合液,，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時,。(6)到時后，根據(jù)細(xì)胞種類決定是否移除混合液,，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時,。當(dāng)復(fù)合物接近細(xì)胞膜時，通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體進(jìn)入細(xì)胞,。寧波細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)貨價

細(xì)胞電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)建議：1.電場強(qiáng)度要合適合適的電場強(qiáng)度對于電轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)非常重要,，電場強(qiáng)度不能過高，過高會增加細(xì)胞的死亡率,；也不能過低,，過低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同細(xì)胞系具有不同的較佳場強(qiáng)值,，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)測定所轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的較佳電場強(qiáng)度,。2.細(xì)胞狀態(tài)要好用于電轉(zhuǎn)的細(xì)胞一般選取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞（15代以內(nèi)，傳代后2d）,。因?yàn)樘幱趯?shù)生長期的細(xì)胞分裂旺盛,，表面結(jié)構(gòu)致密比穩(wěn)定期的細(xì)胞差，電轉(zhuǎn)后，細(xì)胞膜的恢復(fù)能力強(qiáng),，而且處于有絲分裂期的細(xì)胞更容易接受外源DNA溫州正規(guī)細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑直銷廠家轉(zhuǎn)染 ,，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：細(xì)胞狀態(tài)這點(diǎn)非常重要,，不要急于求成,，一定要讓細(xì)胞處于較佳的生長狀態(tài)再做。有文獻(xiàn)說傳代不要超過17代,。細(xì)胞復(fù)蘇后的3代左右時細(xì)胞狀態(tài)較好,，不要用傳了很多代的細(xì)胞去做，細(xì)胞的形態(tài)都會發(fā)生變化,。大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體,，原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化,，融化一管新鮮的細(xì)胞可能會恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性。因此,，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低,，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果?；蛘?，幾種來源于經(jīng)篩選，轉(zhuǎn)染效率較高細(xì)胞亞系的細(xì)胞系現(xiàn)在有售~

如何提高細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率：優(yōu)化細(xì)胞生長狀態(tài)密切觀察您的細(xì)胞;確保它們狀態(tài)良好,。在開始轉(zhuǎn)染細(xì)胞之前,，先制定一個適當(dāng)?shù)姆N板方案，使細(xì)胞密度從轉(zhuǎn)染開始到結(jié)束都保持較佳狀態(tài),。增加成功幾率—細(xì)胞是轉(zhuǎn)染過程中的一個關(guān)鍵元素,，它可以是影響結(jié)果的一致性和質(zhì)量的較重要的變量。此外,，還常用促有絲分裂刺激物(如,，細(xì)菌轉(zhuǎn)化，生長因子,，條件培養(yǎng)基,，以及滋養(yǎng)細(xì)胞)來活化原代培養(yǎng)細(xì)胞。貼壁細(xì)胞相比較懸浮細(xì)胞—在轉(zhuǎn)染效率方面貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞之間的差異明顯,。天生趨于懸浮的細(xì)胞(如HL60,，Jurkat)非常難以轉(zhuǎn)染。相反，天生為貼壁的細(xì)胞(如HEK,，CHO)則可適應(yīng)懸浮生長的條件,。由于脂質(zhì)體對細(xì)胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時,。

轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：培養(yǎng)基中的物品物品,，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒,，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞,。這降低了細(xì)胞的活性,，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品,，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時也要避免使用物品。這樣,，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細(xì)胞,。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，因?yàn)檫@些物品是GENETICIN選擇性物品的競爭性克制劑,。另外，為了保證無血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長,，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量,。大多數(shù)已建立的細(xì)胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包括了表達(dá)不同基因組合的細(xì)胞的混合物,。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化，這會導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化,，融化一管新鮮的細(xì)胞可能會恢復(fù)原先的轉(zhuǎn)染活性。比如,，新鮮融化的NIH3T3細(xì)胞比傳代8次的細(xì)胞表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率,，融化細(xì)胞的進(jìn)一步傳代并沒有降低轉(zhuǎn)染效率。因此,，如果觀察到轉(zhuǎn)染效率降低,，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)較佳結(jié)果瞬時表達(dá)分析所需的人力和時間比穩(wěn)定表達(dá)少。無錫成都細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑

是目前實(shí)驗(yàn)室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一,，其轉(zhuǎn)染率較高,，優(yōu)于磷酸鈣法,。寧波細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)貨價

細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素,，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些物品一般對于真核細(xì)胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性,，使物品可以進(jìn)入細(xì)胞,。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低,。所以,，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進(jìn)行細(xì)胞鋪板時也要避免使用物品,。這樣,，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細(xì)胞。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素,，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外,，為了保證無血清培養(yǎng)基中細(xì)胞的健康生長,，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量~寧波細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)貨價