拭子RNA提取試劑的選擇,?1、產(chǎn)品價(jià)格,。價(jià)格也是選購產(chǎn)品的重要考量因素,。對(duì)于絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)如Northern雜交、RT-PCR、RealTimeRT-PCR,、cDNA文庫構(gòu)建等,,國產(chǎn)試劑盒都能滿足質(zhì)量要求。與國外有名品牌相比,,國產(chǎn)試劑盒的價(jià)格較為便宜,,價(jià)格還不到國外品牌價(jià)格的30%,性價(jià)比較高,。因而,,對(duì)于以上實(shí)驗(yàn)建議選用國產(chǎn)試劑盒。一些經(jīng)費(fèi)不是很多的課題研究或樣本量較大的臨床檢測(cè)項(xiàng)目,,特別適合選用國產(chǎn)試劑盒,。2、與國外有名品牌相比,,國產(chǎn)試劑盒在拭子RNA提取純度上略有不足,,但不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn),特別是下游需要PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)和分子雜交類實(shí)驗(yàn),。在提取得率上,,國內(nèi)試劑盒與國外品牌差別不大,而在價(jià)格方面,,國產(chǎn)試劑盒具有比較明顯的優(yōu)勢(shì),。如果經(jīng)費(fèi)充足,RNA純度要求特別高,,可考慮選擇Q等國外有名品牌,。如果經(jīng)費(fèi)不多或下游主要做PCR或分子雜交等實(shí)驗(yàn),,可考慮選擇性價(jià)比較高的國產(chǎn)品牌,。RNA提取試劑注意事項(xiàng):使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。廈門RNA提取試劑
細(xì)胞RNA提取的方法:異丙醇主要用于沉淀RNA,。取出EP管后可以見到側(cè)壁沉淀,,輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀,,幫助分離剩余的有機(jī)試劑(剩余有機(jī)試劑過多會(huì)影響OD值和PCR反應(yīng)),,輕彈沉淀,使其浮在酒精,,靜置1-2min,,讓酒精充分接觸沉淀,充分溶解有機(jī)試劑,,然后4度離心5min,。輕輕吸棄上清。將EP管再次放于離心機(jī)中瞬時(shí)離心,棄掉管壁殘余液體,。然后將EP管置于超凈臺(tái)中干燥5-10min.,。注意RNA樣品不要過于干燥,否則很難溶解,。加入50ulDEPC處理水,,震蕩充分溶解沉淀。測(cè)量RNA濃度,。將RNA保存于-80度,。合肥RNA提取試劑直銷廠家RNA提取:無論是從細(xì)胞,、血液,、還是組織等高難度樣本提取RNA。
科學(xué)家曾經(jīng)在實(shí)驗(yàn)室里就成功地讓RNA實(shí)現(xiàn)了自我復(fù)制的功能,。不僅如此,,還有科學(xué)家構(gòu)建了一種DNA-RNA雜交基因組的大腸桿菌。這個(gè)實(shí)驗(yàn)證明,,即使有DNA-RNA的雜交鏈的中間態(tài),,生物也不至于會(huì)死亡。所以,,RNA較早可能給就是生物的遺傳物質(zhì),,只是后來逐步被替代了。當(dāng)然,,還有一些次要的原因,,比如,我們都知道DNA是在細(xì)胞核當(dāng)中的,,完成生命活動(dòng)這些步驟其實(shí)都在細(xì)胞核外進(jìn)行,,因此這樣其實(shí)更加安全。而如果是RNA,,那就沒有必要存在細(xì)胞核了,,但是當(dāng)細(xì)胞損失時(shí),就很容易出現(xiàn)問題,。因此,,DNA后來逐漸取代了RNA作為生物的遺傳物質(zhì)。但這并不是說RNA不能夠作為遺傳物質(zhì),,相反它是可以作為遺傳物質(zhì)而存在的,。
RNA提取試劑盒原理:該EpiQuik?總RNA提取試劑盒提供了一種快速,簡單,,經(jīng)濟(jì)有效的方法,,可從全血,哺乳動(dòng)物細(xì)胞,細(xì)菌細(xì)胞和菌類細(xì)胞中分離總RNA,。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶,。專門的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團(tuán)結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,同時(shí)使污染物通過柱被有效地洗去,。純的RNA用RE緩沖液洗脫,,不用酚提取或醇沉淀。RNA提取試劑盒特點(diǎn):1,、快速程序在25-40分鐘內(nèi)提供高質(zhì)量的總RNA,。2、即用型RNA,,可在絕大多數(shù)下游應(yīng)用,,例如RT-PCR,cDNA合成,,NorthernBlotting,,Differentialdisplay,PrimerExtension,,mRNAselection,。3、適用樣品:全血,,哺乳動(dòng)物細(xì)胞,,細(xì)菌細(xì)胞和菌類細(xì)胞(樣品起始量:300μl全血,10^7個(gè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞,,10^9個(gè)細(xì)菌細(xì)胞和10^8個(gè)菌類細(xì)胞,。總共可以使用該試劑盒進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)提取,??俁NA的產(chǎn)量可達(dá)30μg。產(chǎn)量可能因樣品類型而異,。)總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出,。
RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子,。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸,,核糖和堿基構(gòu)成。在細(xì)胞中,,RNA種類繁多,。根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,,即tRNA,、rRNA,以及mRNA。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板,;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識(shí)別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者,;rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所,。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,,像是組成剪接體(spliceosome)的snRNA,負(fù)責(zé)rRNA成型的snoRNA,,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。拭子RNA提取試劑的選擇,?操作簡便性,。蘇州正規(guī)RNA提取試劑廠家直銷
RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。廈門RNA提取試劑
拭子RNA提取試劑的選擇,?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,,如果要提高核酸得率,也可通過增加樣本量來實(shí)現(xiàn),。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,,然后進(jìn)行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣,。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,,應(yīng)及時(shí)考慮更換試劑盒。目前國內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q,、Biog等,。根據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn),Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來回刮擦10次)在0.5-3.5ug,。同樣處理的口咽拭子,,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)的要求,。廈門RNA提取試劑