密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣，用的較少。原理是：像所有的脂質(zhì)小囊泡一樣,，外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中,，其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml，將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質(zhì)上,，隨后通過離心將外泌體分離,。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣,，耗時,，對離心時間極為敏感。具體步驟是：收集培養(yǎng)2d的上清液,。將培養(yǎng)上清液先以1500r/min離心5min除去細(xì)胞及碎片,再依次以1000×g離心10min取上清,10000×g離心30min取上清,然后用100ku超濾離心管(Millipore)濃縮至15mL,目前人們多采用超速離心,、免疫磁珠、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離,。徐州外泌體提取試劑廠家推薦

外泌體，是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn),，但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物,。然而較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白,、脂質(zhì)和核酸,，能作為信號分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細(xì)胞分泌膜泡的興趣,。較近的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在很多生理病理上起著重要的作用,，如免疫中抗原呈遞、一些病癥的生長與遷移,、組織損傷的修復(fù)等,。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物,。徐州正規(guī)外泌體提取試劑價格同時對超速離心機的設(shè)備要求以及操作程序的培訓(xùn)較大提高了提取成本,。

為了分離外泌體，研究人員用兩個這樣的單元串聯(lián)構(gòu)建了一個裝置,。首先,，使用聲波從血液樣品中除去細(xì)胞和血小板,。一旦細(xì)胞和血小板被去除，樣品進(jìn)入第二個微流體單元,，然后使用較高頻率的聲波將外泌體與稍大的細(xì)胞外囊泡分開,。這項工作的通訊作者之一，麻省理工學(xué)院材料科學(xué)與工程系科學(xué)家MingDao博士說：“聲波更溫和,。而且在分離時,，這些囊泡受處理的時間只有1秒鐘或更短。這是一個很大的優(yōu)勢,?！笔褂迷撛O(shè)備，處理100微升未稀釋血液樣本只需要不到25分鐘,?！斑@種新技術(shù)可以解決當(dāng)前外泌體分離技術(shù)的缺點，如周期長,，一致性差,，產(chǎn)量低，污染以及完整性受損等,。我們想要把提取高質(zhì)量的外泌體的過程簡化為按一個按鈕就在10分鐘內(nèi)獲得所需樣品一樣簡單,。”研究人員們說,。

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,，其可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈,、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了一些病癥的生長與侵襲,。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML）細(xì)胞的增殖,、遷移和壓制細(xì)胞凋亡。治病靶標(biāo),。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,，以明顯降低RAS活化,、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程,。免疫。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞,，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗。心血管,。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動脈硬化,。分子標(biāo)記。疾病診斷,。在酒精性肝病,、NASH、菌類性肝炎,、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預(yù)后標(biāo)志多聚物沉淀法早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,。

外泌體的提取,、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論,，較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù),。該方法的主要優(yōu)點是不需要很大的離心力，從而保證了外泌體的完整性,。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,，結(jié)果顯示，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者,。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能,。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法，超濾一般被認(rèn)為是外泌體分離過程中的一個準(zhǔn)備過程,，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì),。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體，和超高速離心相比,，超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時間內(nèi)分離出外泌體,。但是，超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產(chǎn)量,，并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂,。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價值,。徐州正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)

外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等。徐州外泌體提取試劑廠家推薦

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高,、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,，組分經(jīng)過優(yōu)化處理,，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清,、血漿,、尿液及其他體液（腦脊液、腹水,、羊水,、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取，并搭配純化過濾裝置,，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒,。注意事項：1.對于待測樣品粘度過大時，可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理,。2.當(dāng)血清,、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,，收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,，可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過EPF柱離心。3.針對外泌體標(biāo)志蛋白（CD63,CD9,CD81等）進(jìn)行Westernblot檢測,，可以鑒定所提的外泌體,。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量徐州外泌體提取試劑廠家推薦