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南京珠海RNA提取試劑

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-05-28

糞便總RNA快速提取試劑盒:獨(dú)特裂解劑/裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,,然后RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于玻璃奶,,然后將粗純化的玻璃奶轉(zhuǎn)移到離心柱,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸,、細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。試劑盒特點(diǎn):離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好,??朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。兼容性強(qiáng),,適用于各種不同的土壤,、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟,??焖伲?jiǎn)捷,,單個(gè)樣品操作一般可在1小時(shí)內(nèi)完成,。多次柱漂洗確保高純度,,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9以上,可直接用于PCR,,Northern-blot和各種酶切反應(yīng),。總RNA提取試劑:適用范圍普遍,,可以從動(dòng)物組織,。南京珠海RNA提取試劑

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總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,,可見(jiàn)許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),,低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S),。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,,28S的位置大約在2kb,,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大,。注意事項(xiàng):樣品用總RNA提取試劑勻漿后,,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個(gè)月以上,。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,,2-8°C可以保存一周,-20°C條件下可以保存1年,。RNA半衰期比較短,,容易降解,建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),,如反轉(zhuǎn)錄成cDNA,,NorthernBlot等。金華成都RNA提取試劑RNA提取試劑注意事項(xiàng):耐高溫器物可150℃烘烤4小時(shí)以去除RNA酶,。

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RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1,、得率過(guò)低:提取樣本過(guò)低總量不足或者提取樣本過(guò)多裂解不徹底;應(yīng)當(dāng)使用適當(dāng)質(zhì)量的組織或細(xì)胞進(jìn)行提取,,樣本前處理一定要做好,,裂解應(yīng)充分。2,、基因組殘留:Trizol法提取時(shí),,分層后吸取上清時(shí)吸到中間層會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的基因組污染;分層吸取時(shí)應(yīng)當(dāng)格外小心,,不要吸取到中間層,。如果是采用柱式法提取,,可選擇含有DNaseI的試劑盒進(jìn)行提取,吸附在膜上的核酸直接用DNaseI進(jìn)行消化,,可極大限度的降低DNA殘留,。

RNA的提取:眾所周知,,Trizol是一種RNA提取試劑,,內(nèi)含異硫氰酸胍和酚等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞和溶解細(xì)胞中的其他成分,,壓制細(xì)胞釋放出核酸酶,維持細(xì)胞中RNA的穩(wěn)定性,,我們可以在反應(yīng)物中加入Trizol后搖勻,,在加入氯仿離心,這樣的話我們的RNA就進(jìn)入了水相中,,再用異丙醇沉淀水相中的RNA,,即可達(dá)到提取總RNA的目的了。首先我們需要稱(chēng)取一定量的預(yù)處理好的廢酵母配10%左右的酵母溶液,在一定溫度下,加入一定濃度的氯化鈉,之后加入NaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH,攪拌抽提一定時(shí)間后,離心分離上清液,調(diào)節(jié)pH至等電點(diǎn),經(jīng)酒精沉淀獲得核糖核酸,用水定容至100mL取1m適當(dāng)稀釋,調(diào)pH7.0,這樣的話RNA就出現(xiàn)了,,分別測(cè)定吸光值A(chǔ)260和A280并計(jì)算A260/A280,,就可以測(cè)定RNA的提取率了。當(dāng)然啦,,我們還可以進(jìn)行深入研究,,如測(cè)定Nacl的濃度,PH的大小,,以及抽提時(shí)間對(duì)RNA提取率的影響啦,。細(xì)菌總RNA提取試劑盒:本試劑盒可以快速?gòu)募?xì)菌體內(nèi)提取總RNA。

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細(xì)胞RNA提取的方法:異丙醇主要用于沉淀RNA,。取出EP管后可以見(jiàn)到側(cè)壁沉淀,,輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀,,幫助分離剩余的有機(jī)試劑(剩余有機(jī)試劑過(guò)多會(huì)影響OD值和PCR反應(yīng)),,輕彈沉淀,使其浮在酒精,,靜置1-2min,,讓酒精充分接觸沉淀,充分溶解有機(jī)試劑,,然后4度離心5min,。輕輕吸棄上清。將EP管再次放于離心機(jī)中瞬時(shí)離心,,棄掉管壁殘余液體,。然后將EP管置于超凈臺(tái)中干燥5-10min.,。注意RNA樣品不要過(guò)于干燥,否則很難溶解,。加入50ulDEPC處理水,,震蕩充分溶解沉淀。測(cè)量RNA濃度,。將RNA保存于-80度,。總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出,。成都正規(guī)RNA提取試劑廠家直銷(xiāo)

RNA提取試劑注意事項(xiàng):溶液需用DEPC水配制,。南京珠海RNA提取試劑

RNA提取:預(yù)備工作(1)塑料制品:盡量使用一次性無(wú)菌塑料制品,。已標(biāo)明RNase-free的塑料制品,,如沒(méi)有開(kāi)封使用過(guò),通常不必再處理,。處理的步驟如下:O在玻璃燒杯中注入去離子水,,加入DEPC使其終濃度為0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯為活性很強(qiáng)的劇毒物,,須在通風(fēng)櫥中小心使用)O將待處理的塑料制品放入一個(gè)可以高溫滅菌的容器中,,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,,在通風(fēng)柜中37℃或室溫下處理過(guò)夜,。O將DEPC-H2O小心倒入廢液瓶中,將裝有DEPC-H2O處理過(guò)的塑料制品的容器以鋁箔封口,,高溫高壓蒸汽滅菌至少30分鐘,。O滅菌塑料制品烘烤干燥,置潔凈處備用,。(2)玻璃和金屬物品250℃烘烤3小時(shí)以上,。南京珠海RNA提取試劑