RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑,。在破碎和溶解細(xì)胞時(shí)能保持RNA的完整性。無(wú)論是人,、動(dòng)物,、植物還是細(xì)菌組織,,該方法對(duì)少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。TRIpure試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)樣品,,所有的操作可以在一小時(shí)內(nèi)完成,。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染,,故而能夠作RNA印跡分析、斑點(diǎn)雜交,、poly(A)+選擇,、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和分子克隆等,。和進(jìn)口品牌實(shí)驗(yàn)對(duì)照顯示,,公司的產(chǎn)品質(zhì)量已經(jīng)達(dá)到甚至超過(guò)了進(jìn)口產(chǎn)品的質(zhì)量細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):方便快捷的離心柱操作方式。廣州RNA提取試劑廠家批發(fā)價(jià)
對(duì)RNA的科學(xué)研究,,首先要從植物或者動(dòng)物等組織中提取出合格的RNA,。在實(shí)際RNA提取中,有幾個(gè)提取原則:1,、保證RNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性,;2、提取的RNA樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶存在壓制作用的有機(jī)溶劑及過(guò)高濃度的金屬離子,;3,、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度,;4,、排除其它核酸分子(DNA)的污染。常用RNA提取方法有:1TRIzol法,;2TRIzol+過(guò)柱法,;3CTAB+過(guò)柱法;4試劑盒法,。RNA提取試劑盒BiomarkerPlantTotalRNAIsolationKit(Polysaccharides&Polyphenolics–rich),,能從植物組織,特別是富含多糖多酚或淀粉的植物組織(如成熟水稻葉片,,棉花葉片,,擬南芥種子,香蕉,,馬鈴薯塊莖,,蘋果,西瓜果肉,,獼猴桃,,梨,月季等)中快速提取總RNA,,同時(shí)可以處理大量不同樣品,。重慶RNA提取試劑直銷價(jià)拭子RNA提取試劑的選擇?對(duì)離心柱法而言,,拭子核酸得率的高低,。
細(xì)菌RNA快速提取試劑盒:該產(chǎn)品基于獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶,,然后用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,,再通過(guò)一系列快速的去蛋白,、漂洗的步驟將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,,較后低鹽的RNaseFreeH2O將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。該產(chǎn)品可在30min內(nèi)完成樣品RNA的提取,提取的總RNA完整性好,,無(wú)蛋白和基因組DNA污染,。注意事項(xiàng):初次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW瓶加入指定量無(wú)水乙醇,加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇,,以免多次加入,!裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,,避免沾染皮膚,,眼睛和衣服。若沾染皮膚,、眼睛時(shí),,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。所有離心操作步驟,,均可在室溫(15-25℃)下進(jìn)行,。提取細(xì)菌RNA需先配制加了溶菌酶或者Lysostaphin的TE(10mMTris-HCl,1mMEDTA),,TE中已加入溶菌酶或者Lysostaphin,,濃度為1mg/mL。
酵母RNA的提取方法:稀堿法是屬化學(xué)破壁法,,其方法是在一定堿濃度下,,使構(gòu)成細(xì)胞壁的蛋白質(zhì)、脂肪及糖的化合物得到水解,,從而破壞細(xì)胞壁,,此法對(duì)堿的濃度及提取溫度要求比較嚴(yán)格,堿的濃度不可過(guò)濃,,應(yīng)控制在1%,并且對(duì)提取溫度也有一定的要求,,提取時(shí)間短,。因?yàn)樵谶^(guò)分劇烈的條件下,容易使核糖核酸分子內(nèi)的酯鍵斷裂,,使核糖核酸降解而影響收得率,。酵母菌作為重要的模式生物,,是遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究材料。由于酵母菌的細(xì)胞壁成分復(fù)雜,,且較原核生物厚,,難于破碎,因此酵母菌總RNA的抽提純化要比原核生物總RNA的抽提純化困難的多,。如何有效地破碎細(xì)胞壁并保證RNA的完整性,,是獲得高質(zhì)量酵母菌總RNA的關(guān)鍵問(wèn)題??俁NA的提取方法還有很多,,如Trizol法、異硫氰酸胍法,、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法,、尿素法、十二烷基硫酸鈉(SDS)法,、熱硼酸鹽法等,,這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn),不同的方法適用于不同類型的材料,。血漿/血清RNA提取試劑盒:沒(méi)有DNA和蛋白質(zhì)的污染,,適用于RT-PCR、qRT-PCR,、芯片分析,。
RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1、得率過(guò)低:提取樣本過(guò)低總量不足或者提取樣本過(guò)多裂解不徹底,;應(yīng)當(dāng)使用適當(dāng)質(zhì)量的組織或細(xì)胞進(jìn)行提取,,樣本前處理一定要做好,裂解應(yīng)充分,。2,、基因組殘留:Trizol法提取時(shí),分層后吸取上清時(shí)吸到中間層會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的基因組污染,;分層吸取時(shí)應(yīng)當(dāng)格外小心,,不要吸取到中間層。如果是采用柱式法提取,,可選擇含有DNaseI的試劑盒進(jìn)行提取,,吸附在膜上的核酸直接用DNaseI進(jìn)行消化,可極大限度的降低DNA殘留,。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點(diǎn):有效分離和提取細(xì)胞質(zhì)RNA,,與細(xì)胞核RNA。正規(guī)RNA提取試劑價(jià)格
試劑盒中的吸附柱采用特殊的硅基質(zhì)膜材料。廣州RNA提取試劑廠家批發(fā)價(jià)
RNA提取醇沉淀不是越多就越好,。有些實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦,,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次,。實(shí)際上,,任何提取實(shí)驗(yàn),都會(huì)在純度和得率這一對(duì)矛盾中取舍,。醇沉淀會(huì)將脂溶性雜質(zhì)去掉,,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會(huì)連同RNA一起被沉淀下來(lái)。因此,,多整幾次,,并不會(huì)讓RNA的純度翻倍,反而還會(huì)有降低得率的風(fēng)險(xiǎn),。一般情況下,,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,,倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低,,那就只能放棄純度,在低溫沉淀數(shù)小時(shí),,以換來(lái)較高的得率,。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水,,以滅活RNase,。這一點(diǎn)是要肯定的。不過(guò),,在使用DEPC的過(guò)程中,,又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水,,會(huì)有一股“香甜”的味道,。許多人會(huì)以為那是殘留的DEPC而不敢用。實(shí)際上,,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。廣州RNA提取試劑廠家批發(fā)價(jià)