動物細胞RNA提?。?,、懸浮細胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,,用無菌PBS清洗1~2遍后,,再用適量PBS懸浮起來,然后再加入裂解液進行裂解,。千萬不要完全棄掉液體后,,往沉淀細胞里直接加入裂解液,這樣會使外表層的細胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細胞外側,,從而限制沉淀內部的細胞與裂解液的接觸,從而導致細胞裂解不徹底,,降低RNA得率,。2、半貼壁或貼壁不緊的細胞:棄掉培養(yǎng)基后,,用PBS洗1~2次,,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細胞吹下來,,轉移到無RNA酶的EP管中,,加裂解液進行提取。3,、貼壁細胞:需要先用胰酶消化,,然后收集到無RNA酶的EP管中,離心去其上清,,用PBS洗1~2次,,去除多余的胰酶,以適量PBS重懸后繼續(xù)進行提取步驟,。細菌總RNA提取試劑盒:提取的總RNA純度高,,沒有DNA和蛋白質污染,適用于RT-PCR,。金華北京RNA提取試劑
植物RNA快速提取試劑盒:1.固體組織破碎設備,。可用下列裝置之一:1)玻璃勻漿器,。泡酸清潔,,用高壓滅菌蒸餾水洗滌數次。2)研缽,。適用于液氮凍存組織的研磨,,清洗方法同玻璃勻漿器,。3)高速機械勻漿器(Polytron,Tekmar或類似產品),,打開開關,,在蒸餾水中清洗分散器頭數次。2.高壓蒸汽30分鐘消毒一次性吸頭離心管,。RNA沉淀溶解之后,,應嚴格使用高壓消毒的一次性用品。然而PlantRNAtrip能在RNA酶污染環(huán)境下工作,,在裂解步驟可使用未高壓但潔凈的一次性吸頭和離心管,,但光推薦在緊急情況下這樣做。3.普通雙蒸水,,高壓消毒20分鐘,。用于沖洗器皿,配制瓊脂糖凝膠和電泳用緩沖液,。DEPC處理的雙蒸水,。加DEPC到水中至終濃度為0.01%v/v,室溫過夜,,高壓消毒30分鐘,。用于溶解RNA,配制TE緩沖液和75%乙醇,。4.濕冰,。在冰上進行操作有助于減少RNA降解。5.其它用品,。電泳槽,,雙蒸水沖洗。離心機和加樣器,,無需處理,。6.戴手套。注意某些實驗如提取質粒DNA如使用極大量RNA酶,,為防污染,,須較全仔細清洗實驗器具和實驗區(qū)域。石家莊正規(guī)RNA提取試劑產品介紹植物RNA提取試劑產品特點:配有CS過濾柱,,可有效去除其它雜質,。
RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時,,操作方便且經濟實用,。對于動物組織、簡單的植物材料、各種微生物,、培養(yǎng)細胞的totalRNA提取,,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,,進一步豐富了TakaraRNA提取的產品線,。該產品采用了獨特的細胞裂解系統(tǒng),無需苯酚氯仿抽提等步驟,,簡單快捷,。組織或細胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成
環(huán)狀RNA是一類產生于RNA剪切過程中的封閉喚醒RNA分子,,主要由外顯子和(或)內含子構成,。環(huán)狀RNA參與了復雜的RNA-RNA的相互作用網絡,在基因轉錄后調控中發(fā)揮作用,;環(huán)狀RNA可直接與蛋白質結合,,也可通過RNA介導間接與蛋白質發(fā)生關聯,影響蛋白質功能,;部分環(huán)狀RNA具有翻譯功能,。研究發(fā)現,環(huán)狀RNA與一些疾病的發(fā)生,、發(fā)展具有直接關聯,為一些疾病發(fā)病機制提供了新思路,,除此之外,,環(huán)狀RNA在與衰老、炎癥等生理,、病理現象方面也有重大應用,。總RNA提取試劑:自備新開封或專門氯仿,,異丙醇,,75%乙醇,DEPC處理水,。
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一,、原理簡介。改進的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細胞和滅活RNA酶,,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除,,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質膜上洗脫,。二、試劑盒特點:1,、離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,,柱與柱之間吸附量差異極小,,可重復性好??朔藝a試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端,。2、結合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題,。3,、獨有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染,。4,、多次漂洗去蛋白過程,提取RNA純度更高,。5,、有效的去除了無用的5S在總RNA中含量,提高了純度,。RNA提取試劑:在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性,。鄭州RNA提取試劑服務電話
血漿/血清RNA提取試劑盒:沒有DNA和蛋白質的污染,適用于RT-PCR,、qRT-PCR,、芯片分析。金華北京RNA提取試劑
RNA是核糖核酸,,DNA是脫氧核酸,。區(qū)別:紫外吸收:核酸的λm=260nm,堿基展開程度越大,,紫外吸收就越厲害,。當A=1時,DNA:50ug/ml,,RNA和單鏈DNA:40ug/ml,,寡核苷酸:20ug/ml。用A260/A280還可來表示核酸的純度,。沉降速度:對于拓撲異構體(核苷酸數目相同的核酸),,其沉降速度從達到小依次為:RNA;超螺旋DNA>解鏈環(huán)狀DNA;松弛環(huán)狀DNA;線形DNA也就是在離心管中較上層是線形DNA,較下面是RNA,。電泳:核苷酸,、核酸均可以進行電泳,泳動速度主要由分子大小來決定,因此,,電泳是測定核酸分子量的好方法,。DNA分子量測定較直接的方法:用適當濃度的EB(溴嘧啶)染色DNA,可以將其他形式的DNA變成線形DNA,,用電鏡測出其長度,,按B-DNA模型算出bp數,根據核苷酸的平均分子量就可計算出DNA的分子量,。金華北京RNA提取試劑