細胞凍存概念：細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗,。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,，起到了細胞保種的作用,。細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力,。凍存細胞不加任何保護劑,，會導致細胞內冰晶的產生，從而使細胞產生內源性的機械損傷,，引起細胞內環(huán)境滲透壓,，PH，電解質等的改變,，進而促使細胞死亡,。無血清快速細胞凍存液：減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細胞安全,。太原正規(guī)無血清細胞凍存液廠家推薦

細胞凍存中的注意事項：細胞凍存開始時，要溫好相應的培養(yǎng)基和相應的試劑,，以及計數(shù)耗材,，避免操作過程中手忙腳亂。用移液管吹打相應的胞液時,，要保證移液管在液面以下吹打,，管內要有液體，防止產生相應的氣泡,，氣泡的張力會影響細胞的活率和生存狀態(tài),。計數(shù)細胞時要保證取胞液時也要混勻，這個過程比較重要,，細胞不混勻,，計數(shù)不準，此外吹打應該輕柔,，避免細胞在吹打的過程中出現(xiàn)了相應的死亡,。凍存離心用50ml離心管比較好，加凍存液吹打混勻比較方便,，離心后不能過多地晃動離心管,。當離心管液體較多的時候，可以直接傾倒,，不要磕,，多余的液體較好用泵吸出比較好。凍存支數(shù)少的情況，用泵頭輕柔吹打,，避免出現(xiàn)氣泡,，凍存支數(shù)多用移液管吹打。深圳正規(guī)無血清細胞凍存液廠家從冰箱里取出細胞冷凍保存管,，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍,。

細胞凍存，我們應該注意哪些事項：1,、凍存液比例一般是培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1或5:4:1,；動物種屬的原代細胞凍存液可采用的比例是培養(yǎng)基：血清：DMSO=0:9:1，即直接用血清重懸細胞再加入DMSO,，盡管如此,，原代細胞的復蘇成活率還是很低。2,、有文獻表明,，細胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙，因為這一速度可以很好的控制細胞內部晶體的產生,。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確,，目前慣用的就是4℃30min、-20℃1h30min,、-80℃2h后轉入液氮中,。

細胞凍存，我們應該注意哪些事項：1,、液氮內的細胞凍存較長時間不要超過半年,，凍存在液氮中的細胞應一段時間內進行更替。一個細胞系在培養(yǎng)一個月后,，可復蘇一管新的細胞確保其質量沒有發(fā)生太大變化,，傳代幾次后，再凍存留種,。2,、細胞復蘇時，為保證獲得較高的存活率和接種率,，應盡可能的快速完成復蘇,，以避免在升溫過程中細胞內部晶體的產生。書面介紹的復蘇溫度是37℃-42℃,，但是本人在實際操作中發(fā)現(xiàn)40℃環(huán)境下復蘇效果較好。3.復蘇時使用的培養(yǎng)基和凍存時使用的培養(yǎng)基中的血清盡量保證同一批次,?？焖賰龃婧喕藘龃娌襟E，同時不需要使用梯度凍存盒。

無血清細胞凍存液：凍存注意：開蓋之前,，用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身,。以下說明適用于在6孔板內的培養(yǎng)物的凍存。培養(yǎng)物應該在適合傳代的時候進行收集和凍存,。每管所含有的細胞應當來源于6孔板的1個培養(yǎng)孔,。如果使用其他的培養(yǎng)器皿，請相應的調整體積,。1.在室溫（15-25°C）以300xg離心5分鐘,。2.輕輕吸走上清液，注意不要擾動細胞團,。3.用血清學吸管以1mL的TBD-698重懸細胞,。在打散細胞團時，盡量減少細胞聚集體分解,。4.用2mL的血清學吸管將1mL的細胞聚集體轉移到標記好的凍存管中,。5.用以下方法凍存細胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法，每分鐘降低1度,，隨后可以在-196°C液氮長期保存,。不推薦在-80°C長期保存。逐步降溫法：-20°C保存2個小時,，然后-80°C中保存2個小時，隨后可以在-196°C液氮中長期保存,。根據(jù)密度調整細胞凍存 液用量,。昆明正規(guī)無血清細胞凍存液產品介紹

凍存要求發(fā)生改變，因為凍存細胞要進行臨床應用,。太原正規(guī)無血清細胞凍存液廠家推薦

細胞凍存液的操作步驟：1.配置含10%DMSO或凡士林,、10～20%小牛血清的凍存細胞培養(yǎng)液;2.取對數(shù)成長期的體細胞，除去舊細胞培養(yǎng)液,，用PBS清理,。3.除去PBS，添加適量蛋白酶(遮蓋細胞培養(yǎng)皿表層)把單面生長發(fā)育的體細胞消化吸收出來;4.抽濾1000rpm,，5min;5.除去蛋白酶,，添加適量配置好的凍存細胞培養(yǎng)液,，用塑料吸管輕輕地吹打使體細胞勻稱,，記數(shù)，調整凍存液中體細胞的較后相對密度為5牙周106/ml～1牙周107/ml;6.將體細胞分裝進凍存管中，每管1～1.5ml;7.在凍存管上標出體細胞的名字,，凍存時間及作業(yè)者;8.凍存：標準的凍存程序流程為減溫速度-1～-2℃/min;當溫度達-25℃下列時,，可升至-5℃～-10℃/min;到-100℃時，則可快速滲入液態(tài)氮中,。太原正規(guī)無血清細胞凍存液廠家推薦