使用方法:1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被:以包被濃度為2μg/cm2為例,,用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL,。加到相應的培養(yǎng)器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,。開蓋在超凈臺上過夜晾干,,也可以在室溫放置1小時后,用PBS洗3~4次后直接使用,。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間,。2,、三維膠原凝膠的制備:A、無細胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,,加入690μL雙蒸水,,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),,立即混勻,。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要測定pH值)。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,,轉移到培養(yǎng)箱內,。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預平衡,。吸去生理鹽水,,將尾腱稱重(0.5-1克)。寧波鼠尾膠原哪家好
簡介:鼠尾I型膠原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備,,純度達到95%以上,,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養(yǎng)皿的包被,,特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng),;也可用于制備三維膠原凝膠,使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長,。質量標準:1,、SDS-PAGE分析純度大于95%。2,、無菌檢驗結果為陰性,。3、本品2μg/cm2包被細胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細胞,,貼壁及生長正常,。4、本品濃度1mg/mL,,pH7.0時形成具有一定強度的三維膠原凝膠,,NIH-3T3細胞在三維凝膠內生長正常、PC-12細胞在三維凝膠表面生長正常,。杭州正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用,。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿,,培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,,模擬真實的生長環(huán)境,,使細胞在三維環(huán)境中生長。1,,在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長,。1mg/ml濃度以上,pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,,檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內正常生長,、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法:1,、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,,并且制作簡便,成本低廉,。
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法:膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結構的主要組成,。在人的身體中這是皮膚、筋,、軟骨,、骨骼及結締組織的較主要的蛋白質。膠原蛋白占人體蛋白質總量的三分之一,,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,有脯氨酸和羥脯氨酸,。根據其遺傳分子結構遺傳基因的差別,,膠原蛋白分為20幾個亞型。但較為常見的為Ι,、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白,即間質膠原蛋白,。其中I型較為豐富且品質優(yōu)良。I型膠原蛋白分布非常普遍,,是主纖維束的主要成分,,給結締組織以強度;是較豐富的膠原蛋白類型,,尤其是在皮膚真皮,、骨,、筋和腱中。當我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內放置小玻片,,制備細胞爬片時,,可在瓶底涂一層膠原。
鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,,pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌,、預冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),,立即混勻,。再加入100ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試)。膠原蛋白(Collagen)是結締組織和內臟部位外基質的主要成分,。蕪湖正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家
制備鼠尾膠原:吸去生理鹽水,,將尾腱稱重(0.5-1克)。寧波鼠尾膠原哪家好
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,,制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白,。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結合數(shù)小時或者2-8度過夜,。寧波鼠尾膠原哪家好