外泌體的提取方法,，先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對人脂肪來源間充質(zhì)干細胞進行饑餓培養(yǎng),，這樣可使干細胞處于正常生長狀態(tài),，不會被克制生長增殖，其所分泌的外泌體所包含的有效物質(zhì)也更貼近其自然狀態(tài)下的外泌體,，然后將含有外泌體的培養(yǎng)上清液進行低速差速離心(即先一離心處理,、再第二離心處理)以去除細胞及其碎片，用100kd超濾管對低速差速離心后的離心液進行超濾濃縮得到外泌體濃度更高的超濾液,，將超濾液經(jīng)過第三離心處理去除雜質(zhì)后直接用0.22μm過濾器過濾除菌，過濾掉粒徑為220nm以上的物質(zhì),，進一步得到含顆粒粒徑小于220nm的濃縮液,，因超濾濃縮處理和第三離心處理使得液體量濃縮，這樣過濾除菌效率得到較大提高,，較后將濃縮液進行超速離心的第四離心處理分離提取到外泌體,。該外泌體的提取方法，既結(jié)合了差速離心,，又結(jié)合了超濾和超速離心,，通過該提取流程，較終可高效地從人脂肪來源間充質(zhì)干細培養(yǎng)上清液中提取到高濃度,、高純度的外泌體,，具有操作簡單、成本低,，適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的特點,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊,。廣州外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨

外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心,、試劑盒,、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,，然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法，由于離心步驟繁瑣,，費事費力,，而且步驟多導(dǎo)致實驗中容易污染，且損耗量大,，使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細胞上清來說，更是極為不請便,，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,，無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,，都具有操作極其不便的缺點，總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,，造成濃縮效率低，濃縮管重復(fù)利用差,，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,，造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差，對于后續(xù)實驗也有影響,。無錫外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家可將外泌體吸附并分離出來,。

外泌體的提取、分離方法：免疫親和層析法,。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原,、抗體之間高度特異性的親和力進行分離的方法，主要用于生物大分子的分離,、純化,。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體，如TSG101或四跨膜蛋白,。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別，這使得提取的外泌體純度高,，但是產(chǎn)量低,。Zarovni等分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,，從血漿和細胞上清中提取外泌體蛋白,，結(jié)果表明，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標記蛋白(Alix,、CD9,、CD63)，同時,，ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性,。

CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα，也稱為CD172a）的配體,，CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號,，從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進胰腺病細胞增殖,，增強胞飲作用從而促進一些病癥細胞攝取外泌體,。合成納米顆粒對細胞有一定毒性作用，但使用外泌體能夠較小化對細胞的毒性,。研究人員發(fā)現(xiàn),，CD47和病基因KRAS驅(qū)動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,，并增強胰腺病細胞對外泌體的特異性。所以,，外泌體的這種特性增強了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。逐漸取代超速離心法并推廣開來,。有些試劑盒操作簡便,，不用超速離心。

外泌體的提取,、分離方法：梯度密度離心法。研究發(fā)現(xiàn),，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,，因此,，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合，原理是先除去非囊泡物質(zhì),，再通過梯度密度濃縮提取外泌體，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h，但是2012年,，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此,，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時間不充足,，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,，特別是這個密度范圍又比較寬,。外泌體的提取分離：超濾離心。深圳外泌體提取試劑單價

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外泌體表面有其特異性標記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物。廣州外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨