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來源: 發(fā)布時間:2022-08-03

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),,天然存在于血液,、尿液、唾液,、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中,。包括瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞(免疫細胞、神經(jīng)細胞,、干細胞),,都可以產(chǎn)生并釋放exosome。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,,Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞,,也可運輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA,、miRNA,、lncRNA、circRNA,,甚至細胞器進入受體細胞,,參與細胞間通訊。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng),、血管生成、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用,,不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,可作為多種疾病的早期診斷標記物,,也能作為靶向藥物的載體進行疾病,。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,它可以通過外泌體從一個地方轉(zhuǎn)運到另外一個地方行使基因沉默功能,。通過檢測外泌體中miRNA表達變化,,可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,,但同樣存在純度不高的問題,。蕪湖外泌體提取試劑單價

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研究中研究人員發(fā)現(xiàn),胃病細胞周圍富含TAM,。TAM以M2極化表型為特征,,并促進胃病細胞在體外和體內(nèi)的遷移。此外,,研究人員發(fā)現(xiàn)M2衍生的外泌體決定了TAMs介導的遷移活動,。通過使用質(zhì)譜方法,研究人員確定載脂蛋白E(ApoE)是M2巨噬細胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì),。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質(zhì),,是決定胃病細胞遷移潛力的主要驅(qū)動因素。然而,,來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細胞的外泌體在體外和體內(nèi)對胃病細胞的遷移沒有顯著影響,。在機制上,M2巨噬細胞衍生的外泌體介導ApoE啟動的PI3K-Akt信號通路,,并在TAM和受體胃病細胞之間進行細胞間轉(zhuǎn)移,,促進細胞骨架的遷移,。總的來說,,該研究發(fā)現(xiàn)外泌體介導的功能性ApoE蛋白從TAM轉(zhuǎn)移到一些病癥細胞,,促進了胃病細胞的遷移。南京外泌體提取試劑平均價格利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,,便可獲得外泌體,。

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外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,EVs),,其大小為30-150nm,,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等),,參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,,包括血液,、唾液、尿液,、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,,放入離心管中加上消化液進行消化,,經(jīng)水浴、反復輕輕上下顛倒,,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,混勻,,置于冰上,。再進行一系列的差速超速離心過程,包括除雜,、濾膜過濾,、超離等。較后用PBS重懸外泌體,,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM),、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定。來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中

外泌體的形成與鑒定:首先,,細胞膜內(nèi)陷形成一個杯狀結(jié)構(gòu),,包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白,導致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome,,ESE)的從頭形成,,或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合,;trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs,。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes,LSEs),,較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體),。MVBs是通過endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的,這一過程導致MVBs含有多個ILVs,。MVB可以與溶酶體或自噬體融合,,較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白,、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白,、細胞內(nèi)蛋白,、RNA、DNA,、氨基酸和代謝物,。使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,,截留完成后,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,。

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外泌體與肺病預后:外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認為是NSCLC的預后因子,。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發(fā)現(xiàn),外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升,。此外,,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發(fā)率,。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn),,NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA,,其中l(wèi)et-7f,、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調(diào),進一步研究發(fā)現(xiàn)。外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢:無需沉淀試劑,,也無需過夜培養(yǎng),。天津外泌體提取試劑廠家推薦

色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,,但是需要特殊的設(shè)備,,應(yīng)用不普遍。蕪湖外泌體提取試劑單價

外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高、操作難度大,。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,適用于細胞培養(yǎng)上清液,、血清,、血漿、尿液及其他體液(腦脊液,、腹水,、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,,并搭配純化過濾裝置,,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,,可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理,。2.當血清、血漿,、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心,。3.針對外泌體標志蛋白(CD63,CD9,CD81等)進行Westernblot檢測,,可以鑒定所提的外泌體。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量,。蕪湖外泌體提取試劑單價