鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個(gè)材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水,，采用冷凍干燥工藝制備,。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備，較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收,、容易引起機(jī)體過敏,、止血效果差等缺點(diǎn)，本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收,，生物相容性好；止血效果快,，具有很強(qiáng)的親水性,；同時(shí)可啟動(dòng)血小板的凝聚，一旦血小板凝聚,，就可形成血栓,，進(jìn)而促使血漿結(jié)塊阻止血流。同時(shí),，膠原表面的特定區(qū)域可以與細(xì)胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合,，可以起到防止腸粘連的功效。鼠尾膠原醋酸溶解：氯仿的量約為膠原溶液的10%,。寧波重慶鼠尾膠原

鼠尾Ⅰ型膠原：組裝液的配置：1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構(gòu)吸取膠原10μL至小培養(yǎng)皿中,，倒入0.5mL自組裝液,，室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h,。吸取0.05%戊二醛2mL至小培養(yǎng)皿中,，將自組裝24h的膠原浸泡在戊二醛中。然后將膠原經(jīng)去離子水,、50%乙醇,、100%乙醇依次漂洗后進(jìn)行TEM觀察,。3.生物礦化形成仿生骨材料靜滴配置鈣磷礦化液將25mL鈣液(10mmol/L二水氯化鈣+150mmol/L氯化鈉+50mmol/L三羥甲基氨基甲烷+0.02%三氮化鈉)倒入燒杯中，滴入聚丙烯(PAA)至濃度350μg/mL,；滴加1mol/L的氯化氫,，調(diào)節(jié)酸堿度至7.4，然后緩慢滴入25mL磷液(6mmol/L磷酸氫二鈉),，約16滴/min,。唐山正規(guī)鼠尾膠原供應(yīng)商鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠作為基質(zhì)包被培養(yǎng)器皿,。

鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當(dāng)?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié),。目前，臨床上常用的有人工骨移植,、自體骨移植和同種異體骨移植,。其中，人工骨材料多為磷酸三鈣,、半水硫酸鈣等含有鈣和磷的無(wú)機(jī)礦物材料[1-2],，由于不含自體骨組織中的有機(jī)大分子Ⅰ型膠原蛋白，其臨床療效遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于自體骨組織,。但是,，自體骨移植和同種異體骨移植均來源于人類自身骨組織，數(shù)量有限,，難以滿足臨床需要,。因此，研發(fā)與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料,，成為全世界骨組織工程學(xué)者孜孜以求的目標(biāo),。由于天然骨組織是Ⅰ型膠原蛋白和羥基磷灰石鈣生物礦化的產(chǎn)物，在分子結(jié)構(gòu)上,，羥基磷灰石鈣晶體是以Ⅰ型膠原纖維為模板,，呈片狀鑲嵌在膠原纖維分子間隙，沿著膠原纖維的長(zhǎng)軸縱向礦化生長(zhǎng),。本研究仿生天然骨組織的分子結(jié)構(gòu),，酸解提取鼠尾肌腱的Ⅰ型膠原蛋白，重構(gòu)形成Ⅰ型膠原纖維,，然后將Ⅰ型膠原纖維放置在礦化液中模擬人體內(nèi)骨生物礦化,，通過透射電子顯微鏡(TEM)和電子衍射觀察羥基磷灰石鈣晶體在膠原纖維內(nèi)部的骨生物礦化。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉,。

一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法：膠原蛋白是脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。在人的身體中這是皮膚,、筋、軟骨,、骨骼及結(jié)締組織的較主要的蛋白質(zhì),。膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一，不論來源于哪一種動(dòng)物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,，有脯氨酸和羥脯氨酸。根據(jù)其遺傳分子結(jié)構(gòu)遺傳基因的差別,，膠原蛋白分為20幾個(gè)亞型,。但較為常見的為Ι、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白,，即間質(zhì)膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,。I型膠原蛋白分布非常普遍,，是主纖維束的主要成分，給結(jié)締組織以強(qiáng)度,；是較豐富的膠原蛋白類型,，尤其是在皮膚真皮、骨,、筋和腱中,。使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對(duì)分子質(zhì)量和濃度檢測(cè)鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子,。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150μL滴在薄膜上,，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠(，其生物力學(xué)強(qiáng)度極差,，一碰即散,。將鼠尾膠原蛋白進(jìn)行SDS-PAGE，結(jié)果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對(duì)分子質(zhì)量130000附近有明顯條帶,，另一條帶的相對(duì)分子質(zhì)量大于170000(圖2),。膠原蛋白濃度為1.8mg/mL。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中,，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中,。礦化2、6d后,，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進(jìn)行TEM和電子衍射觀察,。鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。金華正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)

開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時(shí)后,。寧波重慶鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。寧波重慶鼠尾膠原