外泌體研究的主要應用：外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,，其可參與到機體免疫應答,、抗原提呈,、細胞遷移,、細胞分化、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,，從而導致大量新生血管的生成，促進了一些病癥的生長與侵襲,。一些病癥,。一些病癥轉(zhuǎn)移。來自白血病干細胞的外泌體促進急性骨髓性白血?。ˋML）細胞的增殖,、遷移和壓制細胞凋亡。治病靶標,。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D,，從而特異性高效靶向至胰腺病細胞,，以明顯降低RAS活化、病細胞增殖和轉(zhuǎn)移過程,。免疫,。β細胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細胞外，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細胞,，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗,。心血管。外泌體介導miR-155從平滑肌細胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細胞導致了內(nèi)皮細胞的損傷促進動脈硬化,。分子標記,。疾病診斷。在酒精性肝病,、NASH,、菌類性肝炎、藥物性肝損傷和肝細胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預后標志外泌體提?。狠^常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑平均價格

密度梯度離心法該方法由于比較繁瑣，用的較少,。原理是：像所有的脂質(zhì)小囊泡一樣,，外泌體可以懸浮于特定密度梯度的蔗糖中，其密度范圍1.13g/ml-1.21g/ml,，將要分離外泌體的樣本液體置于梯度蔗糖介質(zhì)上,，隨后通過離心將外泌體分離。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時，對離心時間極為敏感,。具體步驟是：收集培養(yǎng)2d的上清液,。將培養(yǎng)上清液先以1500r/min離心5min除去細胞及碎片,再依次以1000×g離心10min取上清,10000×g離心30min取上清,然后用100ku超濾離心管(Millipore)濃縮至15mL,重慶正規(guī)外泌體提取試劑平均價格外泌體的提取方法：多聚物沉淀法。

外泌體在肺病進程中的作用：在一些病癥微環(huán)境中,，一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細胞,，壓制機體的抗一些病癥免疫反應；肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a,，可在免疫細胞中結(jié)合并啟動TLR8,，使TLR介導的NF-κB信號通路活化，從而導致一些病癥的生長和轉(zhuǎn)移,。在肺病的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中,，細胞間通訊扮演著重要的角色,。據(jù)有關報道稱，NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉(zhuǎn)移密切相關,。此外,，啟動的T細胞可以通過調(diào)控Fas信號通路增加基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP9）的表達，進而促進肺病的轉(zhuǎn)移,。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點,。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉(zhuǎn)移，但也有報道稱,，外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉(zhuǎn)移與增殖,。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物。

作為一種分子通斷開關的KRAS發(fā)生突變時會處于“開啟”狀態(tài),。在80%～95%的胰腺導管腺?。≒DAC）當中，這個基因發(fā)生突變,，這也是這種一些疾病中較為常見的突變,。這些研究人員證實iExosome能夠運送特異性地靶向KRAS的siRNA和shRNA分子，并且比他們的合成對應物脂質(zhì)體（liposome）更加高效,。脂質(zhì)體不具有外泌體表現(xiàn)出的天然復雜性和優(yōu)勢,。德州大學MD安德森一些疾病中心一些疾病生物學助理教授ValerieLeBleu博士說，“我們的研究提示著與脂質(zhì)體相比,，外泌體表現(xiàn)出運送siRNA分子和壓制侵襲性胰腺瘤生長的優(yōu)異能力,。我們也證實外泌體表面上的CD47存在允許它們躲避來自循環(huán)單核細胞的吞噬作用?！蓖饷隗w的提取,、分離方法：免疫親和層析法。

外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集,。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測到Tau和Aβ蛋白。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測到α-synuclein,，ALS病人外泌體中也可以檢測到SOD1或TDP-43。外泌體與疾病診斷（應用潛能）：外泌體生成機制表明,，通過分析外泌體的組分,，可以幫助識別其來源的細胞類型。這一特性已被應用于開發(fā)心血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,，也在肝腎肺相關疾病中進行研發(fā)測試,。將沉淀物用PBS緩沖液進行懸浮，使外泌體懸浮于液體上層,。根據(jù)外泌體表面的特異生物化學特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來,。武漢外泌體提取試劑進貨價

外泌體提取：尺寸排阻色譜,。尺寸排阻色譜是基于大小而非分子量實現(xiàn)分離大分子,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑平均價格

將濃縮液加至20mmol/LTris/30%蔗糖/45%蔗糖(pH7.4)的密度梯度液上行4℃超速離心100000×g(水平轉(zhuǎn)子SW-41)8h,吸取位于蔗糖之上的顏色明顯較深條帶的液體約5mL,以10倍PBS稀釋混勻后再次用100-ku超濾離心管(Millipore)濃縮至5mL,將濃縮液重新以10倍PBS稀釋后4℃超速離心100000×g(角轉(zhuǎn)子TYPE50.2)4h,收集離心管底部約1mL液體及極微量沉淀(來自2×107個細胞)以20mLPBS重懸即為胞外體,用0.22μm過濾膜除菌后凍存于-80℃?zhèn)溆谩＃ㄔ摬襟E參考文獻“腫瘤細胞來源胞外體的分離鑒定與功能檢測”）優(yōu)點是：分離得到的外泌體純度很高,。缺點是：步驟繁瑣,、耗時耗力、對離心時不好把握,。重慶正規(guī)外泌體提取試劑平均價格