膠原蛋白是脊椎動物和無脊椎動物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。在人的身體中這是皮膚,、筋、軟骨,、骨骼及結(jié)締組織的較主要的蛋白質(zhì),。膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一,不論來源于哪一種動物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,,有脯氨酸和羥脯氨酸。根據(jù)其遺傳分子結(jié)構(gòu)遺傳基因的差別,,膠原蛋白分為20幾個亞型,。但較為常見的為Ι、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白,,即間質(zhì)膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,。鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì),。杭州鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌,、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試),。蕪湖太原鼠尾膠原整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作,避免污染以影響細(xì)胞生長,。
鼠尾膠原:含細(xì)胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,,并放置于冰浴中,。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻,。再加入23μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要測定pH值)。加入760μL的細(xì)胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。本品在室溫下pH中性時可迅速成膠,在操作過程中要盡量保持低溫,。保存條件4℃保存,,切勿凍存,有效期一年,。
鼠尾膠原蛋白I型,,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5.從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,,這時候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,,并且制作簡便,,成本低廉。通常情況下骨質(zhì)總量中的鈣,、鎂,、磷等無機(jī)物質(zhì)光占總量的百分之幾而膠原蛋白等有機(jī)物質(zhì)卻要占超過80%。
膠原蛋白的應(yīng)用:1.膠原天然的緊密的纖維結(jié)構(gòu),,使膠原材料顯示出很強(qiáng)的韌性和強(qiáng)度,,適用于薄膜材料的制備;2.大較膠原被用作制造腸衣等可食用包裝材料.其獨特之處是:在熱處理過程中.隨著水分和油脂的蒸發(fā)和熔化.膠原幾乎與肉食的收縮率一致,。而其他的可食用包裝材料還沒被發(fā)現(xiàn)具有這品質(zhì),;3.由于膠原分子鏈上含有大量的親水基團(tuán).所以與水結(jié)合的能力很強(qiáng).這一性質(zhì)使膠原在食品中可以用作填充劑和凝膠;4.膠原在酸性和堿性介質(zhì)中膨脹,,這一性質(zhì)也應(yīng)用于制備膠原基材料的處理工藝中,。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用,。上海石家莊鼠尾膠原
期間不斷攪拌,,防止凍結(jié)成塊,得到膠原溶脹液,。杭州鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白的用途是什么:顧名思義,,鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì)。膠原蛋白是一種蛋白質(zhì),,能幫助連接皮膚,,骨頭和肌腱等身體組織。鼠尾膠原蛋白的用途很普遍,,可用于化妝品,,工業(yè)和食品生產(chǎn)等領(lǐng)域。它在實驗室中也有一定用途,,因為它幾乎是純膠原蛋白,。在食品加工領(lǐng)域,鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中,。它還可以當(dāng)作酸奶,,冰淇淋,果醬和奶油芝士等食品的增稠劑使用,。在一些低脂肪食品中,,它用于模仿全脂食品的感覺和質(zhì)地。它還用于生產(chǎn)膳食保健品,,據(jù)說能讓手指甲和皮膚看起來更好,。此外,還有基于膠原蛋白的保健品,,可用于促進(jìn)關(guān)節(jié)健康,。杭州鼠尾膠原
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