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鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,,0.1mol/L乙酸(一般不用),,雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻,。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時(shí)需要用pH試紙測試)。膠原蛋白(Collagen)是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,。杭州深圳鼠尾膠原
鼠尾膠原膠凝程序:膠原蛋白I按以下步驟使其pH達(dá)到堿性時(shí)凝膠。1)將無菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室,。用氫氧化銨使紗布飽和,,把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上,暫放置一邊,。2)將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上,,厚度可以根據(jù)需要改變,膠原蛋白I(50-100μL)足以涂覆22mm的蓋玻片,。對于直徑100mm的培養(yǎng)皿,,每個(gè)加入約6mL;對于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL,對于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL,。3)將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘,。4)在無菌蒸餾水中(35mm培養(yǎng)皿加5mL,60mm培養(yǎng)皿加10mL等)浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min,。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無菌蒸餾水,,放置在層流罩中過夜。5)吸出蒸餾水,用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C,。太原正規(guī)鼠尾膠原哪家好將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10PBS,,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B.含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液,,混勻(混勻后pH左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測試),。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后,,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項(xiàng)型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠,,在操作過程中要盡量保持低溫,。鼠尾肌腱膠原蛋白I(rattailtendoncollagentypeI)根據(jù)Birkedal-Hansen方法,經(jīng)過醋酸(HAc)抽提,、氯化鈉沉淀,、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得。
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,,制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜,。制備鼠尾膠原:將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,,轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中。
鼠尾膠原蛋白的用途是什么:顧名思義,,鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來的物質(zhì),。膠原蛋白是一種蛋白質(zhì),能幫助連接皮膚,,骨頭和肌腱等身體組織,。鼠尾膠原蛋白的用途很普遍,可用于化妝品,,工業(yè)和食品生產(chǎn)等領(lǐng)域,。它在實(shí)驗(yàn)室中也有一定用途,因?yàn)樗鼛缀跏羌兡z原蛋白,。在食品加工領(lǐng)域,,鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中。它還可以當(dāng)作酸奶,,冰淇淋,,果醬和奶油芝士等食品的增稠劑使用。在一些低脂肪食品中,,它用于模仿全脂食品的感覺和質(zhì)地,。它還用于生產(chǎn)膳食保健品,據(jù)說能讓手指甲和皮膚看起來更好,。此外,,還有基于膠原蛋白的保健品,可用于促進(jìn)關(guān)節(jié)健康,。建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。廈門正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家
從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥,。杭州深圳鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液(均需要無菌,、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),,雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻,。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測試),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便,,成本低廉,。杭州深圳鼠尾膠原