人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細胞,、免疫細胞,、血小板,、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸,、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學活性。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,，進而靶細胞細胞內(nèi)的信號通路,。二是在細胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合,，從而細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出,。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA,。色譜法,。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備,，應用不普遍,。武漢正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

外泌體的形成與鑒定：首先，細胞膜內(nèi)陷形成一個杯狀結構,，包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關的可溶性蛋白,，導致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成,，或者是杯狀結構直接和已經(jīng)存在的ESEs融合,；trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes,，LSEs),，較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體)。MVBs是通過endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的,，這一過程導致MVBs含有多個ILVs,。MVB可以與溶酶體或自噬體融合，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs,。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白,、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等,。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白,、細胞內(nèi)蛋白、RNA,、DNA,、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜,，通過離心截留上清中的外泌體,，截留完成后。開封正規(guī)外泌體提取試劑直銷價可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,，以評估近似外泌體大小范圍和濃度,。

目前的主流觀點認為，外泌體的產(chǎn)生過程為：細胞膜內(nèi)陷,，形成內(nèi)體（endosome）,，再形成多泡體（multivesicularbodies，MVB）,，較后分泌到胞外成為外泌體,。外泌體中攜帶有母細胞的多種蛋白質(zhì)、脂類,、DNA和RNA等重要信息,。外泌體較早見于1981年，EGTrams等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結構的小囊泡,，并命名為exosome,。對于外泌體的作用，當時推測為細胞排泄廢物的一種方式,。1996年GRaposo等發(fā)現(xiàn)類似于B淋巴細胞的免疫細胞也會分泌抗原呈遞外泌體（antigenpresentingvesicle）,，所分泌的外泌體可以直接刺激效應CD4+細胞的抗一些病癥反應,。2007年HValadi等進一步發(fā)現(xiàn)細胞之間可以通過外泌體中RNA交換遺傳物質(zhì)。隨著有關外泌體研究越來越多,，研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機體免疫應答,、抗原呈遞、細胞分化,、一些病癥生長于侵襲等各種生物過程中,。目前人們多采用超速離心、免疫磁珠,、超濾,、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離。

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,，直徑約為30-200nm,，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態(tài),、雙層膜結構,，天然存在于血液、尿液,、唾液,、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞（免疫細胞,、神經(jīng)細胞,、干細胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,，Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞，也可運輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊,。Exosome在免疫應答,、炎癥反應、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關鍵作用，不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,，可作為多種疾病的早期診斷標記物,，也能作為靶向藥物的載體進行疾病多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。

外泌體的提取、分離方法：聚合物沉淀法,。聚合物沉淀法用于分離病毒和其他的生物大分子已有50多年歷史,，近幾年，將其作為一種新的方法來分離外泌體,。目前，市場已經(jīng)有應用聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)溶液提取外泌體的試劑盒,，較常見的是SystemBiosciences公司的ExoQuick?和ExoQuick-TC?kits,，該試劑盒操作簡單不需要特殊的儀器，但是價格昂貴,。提取外泌體的試劑盒主要成分是PEG8000(30%~50%),將試劑盒與體液或細胞培養(yǎng)液4℃孵育過夜,，之后再低速離心。利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離,，便可獲得外泌體,。徐州正規(guī)外泌體提取試劑直銷價

外泌體提取：回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關）,，純度也受到質(zhì)疑,。武漢正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法,。外泌體表面有其特異性標記物（如CD63,、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,，即可將外泌體吸附并分離出來,。磁珠法具有特異性高、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點,，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗,，難以普遍普及。2,、多聚物沉淀法,。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀,，早先應用于從血清等樣本中收集病毒,，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物,，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等武漢正規(guī)外泌體提取試劑推薦廠家