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來源: 發(fā)布時間:2022-11-02

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高、操作難度大,。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,適用于細胞培養(yǎng)上清液,、血清,、血漿、尿液及其他體液(腦脊液,、腹水,、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,,并搭配純化過濾裝置,,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,,可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理,。2.當(dāng)血清、血漿,、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,可用4℃預(yù)冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心,。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,。上海外泌體提取試劑進貨價

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外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,,多角度進行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,,如CD9、CD63和CD81,;細胞質(zhì)蛋白,,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins);使用可截留100KD分子量的膜,,通過離心截留上清中的外泌體,,截留完成后長沙外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受?歡迎,但過程比較費時,,且回收率不穩(wěn)定,純度也受到質(zhì)疑,。

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外泌體:該研究主要是做了牡蠣基因組測序,,并揭示其應(yīng)激適應(yīng)和殼結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。其中涉及,,所鑒定的259種殼蛋白中的84%不是經(jīng)典分泌蛋白,;它們可能是細胞的一部分或被外泌體沉積而來。259個殼蛋白中的61個與外泌體數(shù)據(jù)庫中的蛋白質(zhì)匹配,,支持了外泌體的存在,。在礦化前緣處觀察到含有方解石晶體的細胞和外泌體樣囊泡,盡管它們在殼形成中的重要性是有爭議的,。這項研究為它們在殼內(nèi)的存在及其可能參與殼形成提供了分子證據(jù),。Hedgehog(Hh)蛋白的保守家族作為短距離和長距離分泌的形態(tài)發(fā)生素,在胚胎發(fā)育過程中控制組織構(gòu)型和分化,。成熟的Hh攜帶疏水性棕櫚酸和對其細胞外擴散至關(guān)重要的膽固醇修飾,。

由于這些核酸被囊膜包裹而被保護,穩(wěn)定性高,,不易降解,,是一種用于一些病癥診斷和預(yù)后監(jiān)測的非常理想的新型生物標記物一些疾病的早期診斷、用藥監(jiān)控,、預(yù)后判斷,。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認識加深,,外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術(shù)已被許多臨床科研機構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷,、治病和監(jiān)測;如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。外泌體(Exosome)是從體液(尿液,、血液、唾液,、腹水,、胸腹水等)和細胞液中快速提取的,其是活細胞分泌到胞外的囊泡樣小體,,含有多種蛋白和核酸分子(DNA,、RNA、以及miRNA),,在體內(nèi)細胞間物質(zhì)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用,。利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。

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用于外泌體提取的體液收集注意事項:1、選擇血清還是血漿,?推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。血液凝固過程中血小板會產(chǎn)生大量外泌體,含量占血清中外泌體的50%以上,,選擇血漿可避免不必要的影響,。2、注意抗凝劑的選擇,。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),,這可能是因為肝素與引物和/或酶有競爭作用。除了克制PCR,,肝素可以與外泌體結(jié)合,,阻止細胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本,。EDTA和雙嘧達莫(CTAD),CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體,。EDTA可能會干擾PCR反應(yīng)(盡管其程度小于肝素),,但是還是優(yōu)于其他選擇。此外,,有研究表明鈣螯合劑可在體外促進外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA,、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量。使用肝素時這種影響就不會發(fā)生,,因此建議在測量外泌體的精確數(shù)量時選用肝素,。但是也有研究表明肝素可以導(dǎo)致體外條件下外泌體的減少??傊?,目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對外泌體的釋放,作用和下游反應(yīng)產(chǎn)生特異性影響,。使用可截留100KD分子量的膜,,通過離心截留上清中的外泌體,截留完成后,。太原外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細菌,,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。上海外泌體提取試劑進貨價

外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,,EVs),其大小為30-150nm,,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等),參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織,、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進行消化,,經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,,混勻,置于冰上,。再進行一系列的差速超速離心過程,,包括除雜、濾膜過濾,、超離等,。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM),、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定,。來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中上海外泌體提取試劑進貨價