用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：1、選擇血清還是血漿,？推薦大多數(shù)研究選擇血漿,。血液凝固過程中血小板會(huì)產(chǎn)生大量外泌體，含量占血清中外泌體的50%以上,，選擇血漿可避免不必要的影響,。2、注意抗凝劑的選擇,。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān),，這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競爭作用。除了克制PCR,，肝素可以與外泌體結(jié)合,，阻止細(xì)胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本,。EDTA和雙嘧達(dá)莫（CTAD）,，CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會(huì)干擾PCR反應(yīng)（盡管其程度小于肝素）,，但是還是優(yōu)于其他選擇,。此外，有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA,、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量,。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量。天津外泌體提取試劑哪里買

外泌體提?。?,、過濾,。超濾膜也可用于分離外泌體。根據(jù)外泌體的大小,，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體,。較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑,，可用于收集大于800nm,、400nm或200nm的外泌體，也有設(shè)計(jì)成微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)以分離40-100nm外泌體：不過,，該方法由于過濾膜的粘附,，可能會(huì)損失外泌體，并且過濾時(shí)的壓力和剪切力,，可能會(huì)使外泌體變形受損,。2、基于聚合物的沉淀技術(shù),?；诰酆衔锏某恋砑夹g(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃溫育并低速離心,。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇（PEG）,。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點(diǎn)，包括對分離的外泌體影響小,、pH中性等,。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物（包括脂蛋白）而且,，聚合物材料的混雜可能會(huì)影響下游分析唐山外泌體提取試劑外泌體的提取分離：試劑盒提取,。

外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷：近年來眾多文獻(xiàn)報(bào)道，肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)生的發(fā)展,，是早期診斷肺病的有效途徑,。有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%,，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%,，因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì),，進(jìn)一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導(dǎo)途徑以促進(jìn)一些病癥的發(fā)生的發(fā)展,，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物。近幾年來,，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,。

研究表明被特定部位的細(xì)胞獲取的一些病癥外泌體可為一些病癥的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達(dá)譜,，整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),，而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取,，進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后啟動(dòng)了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá),。較后通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測一些病癥轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo),。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。

外泌體的提取,、分離方法：梯度密度離心法。研究發(fā)現(xiàn),，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,，因此，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,，原理是先除去非囊泡物質(zhì)，再通過梯度密度濃縮提取外泌體,，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h，但是2012年,，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,，因此，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體,。如果離心時(shí)間不充足,，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層，特別是這個(gè)密度范圍又比較寬,。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,。成都正規(guī)外泌體提取試劑廠家推薦

利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。天津外泌體提取試劑哪里買

有的外泌體分離方法需要高速離心,，需要使用大型機(jī)器,，耗費(fèi)近24小時(shí)的時(shí)間才能獲得，非常不便,。而高離心力也可能破壞囊泡,。降低樣品的質(zhì)量。這項(xiàng)研究有望解決這一難題,。在論文中,，研究人員們提供了一種通過微流體和聲學(xué)的獨(dú)特組合從體液樣品中捕獲外泌體的新穎方法。他們開發(fā)的原始聲學(xué)分選裝置由兩個(gè)傾斜的聲學(xué)換能器和一個(gè)微流體通道組成,，當(dāng)這些傳感器產(chǎn)生的聲波相互碰撞時(shí),，形成產(chǎn)生一系列壓力節(jié)點(diǎn)的駐波,。每當(dāng)細(xì)胞或顆粒流過通道并遇到一個(gè)節(jié)點(diǎn)時(shí)，壓力會(huì)將細(xì)胞引導(dǎo)離開中心一點(diǎn)點(diǎn),。細(xì)胞移動(dòng)的距離取決于大小和其他屬性（如可壓縮性）,，這樣，當(dāng)?shù)竭_(dá)通道末尾時(shí),，不同大小和性質(zhì)的細(xì)胞就能夠被分離開來,。這種方法分離得到的外泌體，基本上不改變其生物或物理特征,，為開發(fā)評估人類健康以及疾病診斷和進(jìn)展提供了有吸引力的新方法,。天津外泌體提取試劑哪里買