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miRNA是一類內(nèi)源性的約22個(gè)核苷酸的非編碼RNA分子,,可參與轉(zhuǎn)錄后的基因調(diào)控。在細(xì)胞的分化和發(fā)育,,細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和對傳染的應(yīng)答等生物學(xué)過程中,,miRNA發(fā)揮了重要作用。成熟的miRNA主要通過翻譯壓制來調(diào)控內(nèi)源性基因的表達(dá),。miRNA的應(yīng)用有miRNA模擬物和壓制劑,。miRNA模擬物是化學(xué)合成的雙鏈RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,,模擬成熟的內(nèi)源性miRNA分子,;miRNA壓制劑是單鏈經(jīng)過修飾的RNA分子,通過傳染到細(xì)胞中,,特異性的壓制miRNA的功能,。miRNA模擬物和壓制劑可以用于研究單個(gè)miRNA錯(cuò)誤調(diào)節(jié)所造成的生物學(xué)影響,也能用于確定某個(gè)miRNA分子的特異性靶標(biāo)基因,。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)miR-143可調(diào)控KRAS原病基因,,為病癥的醫(yī)治提供了新的靶點(diǎn)和醫(yī)治方法,。快速程序在25-40分鐘內(nèi)提供高質(zhì)量的總RNA,。唐山正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)
RNA是核糖核酸,,是存在于生物細(xì)胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體,。RNA是由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成的長鏈狀分子,。一個(gè)核糖核苷酸分子則由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成,。在細(xì)胞中,,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,,即tRNA,、rRNA,以及mRNA,。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板,;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者;rRNA是組成核糖體的部分,,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的機(jī)械,。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,可調(diào)節(jié)基因表達(dá),。而其他如I,、II型內(nèi)含子、HDV,、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶,。合肥正規(guī)RNA提取試劑推薦廠家再采集樣本之后馬上加入 DNA/RNA Shield,,可以快速降解掉 RNase 等蛋白物質(zhì)。
Trizol法是一種新型總RNA抽提試劑,,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),,能迅速破碎細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶,。雖然Trizol里面含有RNA酶壓制劑的,,1ml的Trizol一般較多只能裂解100mg的組織。但是如果組織過量,,Trizol無法完全浸潤組織無法完全裂解組織,,多余組織內(nèi)的RNA酶等物質(zhì)會導(dǎo)致RNA的降解。這是RNA降解的很重要的原因。同時(shí),,由于RNA容易降解,,在實(shí)驗(yàn)過程中一般都要求口罩的,避免組織的污染,。同時(shí)選用的無RNA酶的進(jìn)口泵頭,、EP管以及DEPC水,在提取過程中,,一定要時(shí)刻提醒自已RNaseFree-RNaseFree-RNaseFree,實(shí)驗(yàn)就成功一半啦~
rRNA是細(xì)胞內(nèi)的一種基本RNA,,與r蛋白一起構(gòu)成蛋白質(zhì)合成的場所—核糖體。隨著rRNA基因序列越來越了解,,其在生物研究中也的得到了更普遍的應(yīng)用,,主要表現(xiàn)在生物進(jìn)化研究和分子流行病研究。(1)rRNA在生物進(jìn)化上的研究,。rRNA具有高度保守性,,且普遍存在于各種生物中,rRNA提供了足夠的序列信息?,F(xiàn)在還可用于在細(xì)菌分類,、細(xì)菌鑒定等方面。(2)rRNA在分子流行病上的研究,。目前,人們已經(jīng)把rRNA在進(jìn)化上的普遍差異應(yīng)用到了流行病學(xué)研究方面,,通過對不同細(xì)菌進(jìn)行鑒定分類,,從而明確病因,追蹤傳染源,,進(jìn)一步控制及預(yù)防疾病,。rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場所,。
經(jīng)典Trizol法并不能獲得總RNA:這個(gè)事實(shí)可能會刷不少新手甚至老手的三觀,,但確有實(shí)驗(yàn)支持:經(jīng)典Trizol法會選擇性丟失低GC比的miRNA。這一點(diǎn),,源自一則作者自撤稿的故事,。V.NarryKim是韓國鼎鼎大名的美女科學(xué)家,專做RNA相關(guān)的研究,,包括miRNA,。幾年前她們組發(fā)現(xiàn)一個(gè)奇怪的“現(xiàn)象”,即貼壁細(xì)胞在消化之后,,會有一些miRNA的豐度突然降低,,看起來好像是被快速“降解”掉了,并據(jù)此寫了一篇文章發(fā)到MolecularCell上。但很快她們就發(fā)現(xiàn),,這個(gè)“現(xiàn)象”難以重復(fù):如果用Trizol做實(shí)驗(yàn),,就一定是陽性結(jié)果,而用試劑盒提RNA,,就重復(fù)不出來,。難道是號稱能提總RNA的Trizol方案出了問題?確實(shí)如此,。經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)后發(fā)現(xiàn),,經(jīng)典的Trizol方案會使得低GC比的miRNA丟失。RNA提取試劑注意事項(xiàng):為防止濺入眼睛,,請戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏,。正規(guī)RNA提取試劑進(jìn)貨價(jià)
優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶。唐山正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)
RNA提取試劑注意事項(xiàng):1,、必須戴一次性手套操作,,且盡量不要對著RNA樣品說話,以防RNA酶污染,。建議戴一次性口罩操作,。2、TRIReagent含有毒物質(zhì)苯酚,,避免接觸皮膚或吸入,。為防止濺入眼睛,請戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏,。如皮膚接觸TRIReagent,,請立即用大量去垢劑和水沖洗,如仍有不適,,請聽取醫(yī)生意見,。3、TRIReagent抽提總RNA的同時(shí),,理論上也可抽提蛋白和DNA,,但未經(jīng)測試。4,、為了您的安全和健康,,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。是基于異硫氰酸胍/苯酚法的一種即用的從細(xì)胞和組織中提取總RNA的試劑,,在樣品裂解或勻漿過程中取出水相,,用異丙醇可沉淀回收RNA;中間層用乙醇沉淀可回收DNA,;有機(jī)相用異丙醇沉淀可回收蛋白,。唐山正規(guī)RNA提取試劑單價(jià)