外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,，直徑約為30-200nm,，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu),，天然存在于血液、尿液,、唾液,、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細胞在內(nèi)幾乎所有類型的細胞（免疫細胞,、神經(jīng)細胞,、干細胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,，Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞，也可運輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用，不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,，也能作為靶向藥物的載體進行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,，它可以通過外泌體從一個地方轉(zhuǎn)運到另外一個地方行使基因沉默功能,。通過檢測外泌體中miRNA表達變化，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能,。外泌體：形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān),。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范,、統(tǒng)一定量及鑒定等,。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒,、超濾法,、蔗糖密度梯度離心等，然而各種方法均有其利弊,。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,，由于離心步驟繁瑣，費事費力,，而且步驟多導(dǎo)致實驗中容易污染,，且損耗量大，使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定,。而且對于抽提細胞上清來說,，更是極為不請便，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管,，無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,，都具有操作極其不便的缺點，總之非常麻煩,。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔,，造成濃縮效率低，濃縮管重復(fù)利用差,，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團,，造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差，對于后續(xù)實驗也有影響,。外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹活細胞分泌到胞外的囊泡樣小體,，含有多種蛋白和核酸分子(DNA、RNA,、以及miRNA),。

為了分離外泌體，研究人員用兩個這樣的單元串聯(lián)構(gòu)建了一個裝置,。首先,，使用聲波從血液樣品中除去細胞和血小板。一旦細胞和血小板被去除,，樣品進入第二個微流體單元,，然后使用較高頻率的聲波將外泌體與稍大的細胞外囊泡分開。這項工作的通訊作者之一,，麻省理工學(xué)院材料科學(xué)與工程系科學(xué)家MingDao博士說：“聲波更溫和,。而且在分離時，這些囊泡受處理的時間只有1秒鐘或更短,。這是一個很大的優(yōu)勢,?！笔褂迷撛O(shè)備，處理100微升未稀釋血液樣本只需要不到25分鐘,?！斑@種新技術(shù)可以解決當(dāng)前外泌體分離技術(shù)的缺點，如周期長,，一致性差,，產(chǎn)量低，污染以及完整性受損等,。我們想要把提取高質(zhì)量的外泌體的過程簡化為按一個按鈕就在10分鐘內(nèi)獲得所需樣品一樣簡單,。”研究人員們說,。

在無菌條件下提取人體體液,，并用PBS緩沖液進行稀釋，然后通過離心篩選初步去除體液中的細胞成分和細胞碎片,，制成體液樣本備用,；體液樣本純化：通過過濾膜對上述體液樣本進行過濾，進一步去除體液中的細胞殘片及其他雜質(zhì),，靜置10～15分鐘,，留取沉淀物備用；外泌體提?。簩⑸鲜龀恋砦镉肞BS緩沖液進行懸浮,，使外泌體懸浮于液體上層，然后用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體,，置于80℃儲存?zhèn)溆?。此提取方法條件復(fù)雜，成本高,，專利申請利用靜置不太可能把外泌體沉降下來,；根據(jù)外泌體表面的特異生物化學(xué)特性通過提取試劑的特異配方把外泌體從水相中沉降下來。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物?，F(xiàn)已證實可以分泌外泌體的細胞有：肥大細胞、淋巴細胞,、樹突狀細胞,、一些病癥細胞、間充質(zhì)干細胞等,。

人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,，包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板,、平滑肌細胞等,。當(dāng)其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性,。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,，進而啟動靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中,，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合，從而啟動細胞內(nèi)的信號通路,。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出,。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA,。形成了一種全新的細胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進程密切相關(guān),。長沙正規(guī)外泌體提取試劑廠家

如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵,。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集菌類，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān),。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物,。鄭州正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

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