RNA提取試劑注意事項:1,、需自備氯仿,異丙醇,,DEPC,,75%乙醇(DEPC水配制),,和DEPC水。2,、所有離心管,,泵頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶,,其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜,,然后滅菌,烘干,。溶液需用DEPC水配制,。加0.01%(體積比)diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級水中,,處理過夜,滅菌即成DEPC水,。3,、使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因為在細(xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會被釋放出來并剪切樣品,。如果不能及時抽提RNA,,推薦先加入適量TRIReagent,并裂解樣品后凍存,。RNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題,。金華RNA提取試劑銷售廠家
細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點:1.有效分離和提取細(xì)胞質(zhì)RNA,與細(xì)胞核RNA,。2.方便快捷的離心柱操作方式,。3.提取的RNA,品質(zhì)高,,產(chǎn)量多,。4.試劑盒不含苯酚,可提取所有RNA(含RNA),。5.純化的RNA可用于任何應(yīng)用,,包括RT-PCR,qRT-PCR,,RNA-Seq,,陣列等。6.細(xì)胞質(zhì)RNA不含DNA,,可直接用于RT-PCR/qRT-PCR,。7.試劑盒可用于哺乳動物細(xì)胞或者組織樣品的提取。在某些情況下,,研究者們更希望能夠提取特定分餾的RNA,,而不是總RNA。例如,,在一些表達(dá)譜研究中,,較好能夠提取成熟的細(xì)胞質(zhì)(Cytoplasmic)RNA?;蛘?,在研究分析未剪接的RNA前體時,提取細(xì)胞核(Nuclear)RNA會是一個更好的選擇,。然而,,市面上絕大多數(shù)廠家只能為您分別提供2種試劑盒來提取細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核的RNA,不光費(fèi)用高昂,,而且浪費(fèi)大量的材料與時間,。該EpiQuik?總RNA提取試劑盒提供了一種快速,,簡單,經(jīng)濟(jì)有效的方法合肥正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦拭子RNA提取試劑的選擇,?對離心柱法而言,,拭子核酸得率的高低,。
DNA稱脫氧核糖核酸,,是一種分子,雙鏈結(jié)構(gòu),,由脫氧核糖核苷酸(成分為:脫氧核糖,、磷酸及四種含氮堿基)組成??山M成遺傳指令,,引導(dǎo)生物發(fā)育與生命機(jī)能運(yùn)作。主要功能是長期性的資訊儲存,,可比喻為“藍(lán)圖”或“食譜”,。RNA稱核糖核酸,是以DNA的一條鏈為模板,,以堿基互補(bǔ)配對原則,,轉(zhuǎn)錄而形成的一條單鏈,主要功能是實現(xiàn)遺傳信息在蛋白質(zhì)上的表達(dá),,是遺傳信息傳遞過程中的橋梁,。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤,,G鳥嘌呤,,C胞嘧啶,U尿嘧啶,。其中,,U尿嘧啶取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成為RNA的特征堿基。RNA是核糖核酸,,DNA是脫氧核酸,。區(qū)別:1.兩性解離:DNA無,bai只有酸解離,,堿基被屏蔽(在分子內(nèi)部形成了H鍵),。RNA有,有PI,。2.粘度大:DNA;RNA,,粘度由分子長度/直徑?jīng)Q定,DNA為線狀分子,,RNA為線團(tuán),。3.堿的作用:DNA耐堿RNA易被堿水解,。4.顯色反應(yīng):鑒別DNA和RNA+濃HClRNA------→綠色化合物DNA------→藍(lán)紫色化合物苔黑酚。二苯胺啡啶溴紅(熒光染料)和溴嘧啶都可對DNA染色,,原理是卡在分子中,,DNA的離心和電泳顯色可用它們。
細(xì)胞RNA提取的方法:異丙醇主要用于沉淀RNA,。取出EP管后可以見到側(cè)壁沉淀,,輕輕吸棄上清。向EP管中加入75%酒精洗滌沉淀,,幫助分離剩余的有機(jī)試劑(剩余有機(jī)試劑過多會影響OD值和PCR反應(yīng)),,輕彈沉淀,使其浮在酒精,,靜置1-2min,,讓酒精充分接觸沉淀,充分溶解有機(jī)試劑,,然后4度離心5min,。輕輕吸棄上清。將EP管再次放于離心機(jī)中瞬時離心,,棄掉管壁殘余液體,。然后將EP管置于超凈臺中干燥5-10min.。注意RNA樣品不要過于干燥,,否則很難溶解,。加入50ulDEPC處理水,震蕩充分溶解沉淀,。測量RNA濃度,。將RNA保存于-80度。tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)者,。
動物組織總RNA提?。?、盡量選取新鮮的組織,,如果不是新鮮的(較好在三個月之內(nèi)-80℃冰箱或者在液氮中凍存的,。在剪取組織時,不要拿到室溫直接剪取,,一定要放到冰盒上,,盡量避免反復(fù)凍融。2,、用干凈的剪刀鑷子剪取一小塊組織,,剪取樣本時盡量剪組織中心的部位,或者先將大塊的組織先從中間切開,然后再在新鮮切口的位置剪取樣本,。取下的組織要充分的剪碎,,將剪碎的組織放到無RNA酶的EP管中,加入裂解液,,剪碎的組織要充分接觸裂解液,,準(zhǔn)備勻漿。3,、正常組織選取綠豆粒大?。?0~60mg)的組織進(jìn)行勻漿,如果組織中含有大量的蛋白,、脂肪或者是緊密的纖維組織比如肝臟等,,適當(dāng)增減剪取組織的量(可選10~20mg),。4,、如果提取的是魚肌肉,蝦肉,,海蜇等含水分較多的組織時則應(yīng)當(dāng)適當(dāng)提高樣本量用量(推薦100~200mg),。5、條件允許的情況下,,動物組織使用高通道組織勻漿機(jī)勻漿后即可直接進(jìn)行提取步驟,,如沒有該設(shè)備。6,、較后提取后得到的RNA一定要立即放到冰盒上,,以減少RNA的降解。植物RNA提取試劑產(chǎn)品特點:配有CS過濾柱,,可有效去除其它雜質(zhì),。金華RNA提取試劑
血漿/血清中miRNA提取試劑盒:是專門針對血清、血漿樣本中miRNA提取而開發(fā)的,。金華RNA提取試劑銷售廠家
Trizol是一種總RNA抽提試劑,,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞,,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性,。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,,Trizol試劑可保持RNA的完整性,,同時能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后,,裂解液分層成水相和有機(jī)相,。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,,RNA通過異丙醇沉淀回收,。移去水相后,,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì),。異硫氰酸胍氯化銫超速離心法:原理:使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效壓制RNA酶的活性,,經(jīng)過起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì),進(jìn)行密度梯度超速離心,,RNA沉淀于管底,,而DNA與蛋白質(zhì)在上清液中。使用這種方法,,不但能得到高質(zhì)量的RNA,,而且能同時分離出細(xì)胞染色體DNA。金華RNA提取試劑銷售廠家
蘇州君欣生物科技有限公司成立于2019-12-16,,位于江蘇省張家港市塘橋鎮(zhèn)東城科技創(chuàng)業(yè)園C幢二樓,,公司自成立以來通過規(guī)范化運(yùn)營和高質(zhì)量服務(wù),贏得了客戶及社會的一致認(rèn)可和好評,。公司主要產(chǎn)品有原代細(xì)胞,,無血清細(xì)胞凍存液,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,,動物疾病模型等,,公司工程技術(shù)人員、行政管理人員,、產(chǎn)品制造及售后服務(wù)人員均有多年行業(yè)經(jīng)驗,。并與上下游企業(yè)保持密切的合作關(guān)系。蘇州君欣生物集中了一批經(jīng)驗豐富的技術(shù)及管理專業(yè)人才,,能為客戶提供良好的售前,、售中及售后服務(wù),并能根據(jù)用戶需求,,定制產(chǎn)品和配套整體解決方案,。蘇州君欣生物科技有限公司以先進(jìn)工藝為基礎(chǔ)、以產(chǎn)品質(zhì)量為根本,、以技術(shù)創(chuàng)新為動力,,開發(fā)并推出多項具有競爭力的原代細(xì)胞,無血清細(xì)胞凍存液,,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,,動物疾病模型產(chǎn)品,確保了在原代細(xì)胞,,無血清細(xì)胞凍存液,,干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基,動物疾病模型市場的優(yōu)勢。