外泌體在肺病進程中的作用：在一些病癥微環(huán)境中,，一些病癥細胞來源的外泌體能夠誘導CD4+T分化為調(diào)節(jié)性T細胞,，壓制機體的抗一些病癥免疫反應,；肺病細胞分泌的外泌體含有miR-21和miR-29a，可在免疫細胞中結合并啟動TLR8,，使TLR介導的NF-κB信號通路活化,，從而導致一些病癥的生長和轉移。在肺病的侵襲和轉移過程中,，細胞間通訊扮演著重要的角色,。據(jù)有關報道稱，NSCLC分泌的外泌體內(nèi)TGFβ和IL10的高表達與肺病的轉移密切相關,。此外,，啟動的T細胞可以通過調(diào)控Fas信號通路增加基質金屬蛋白酶9（MMP9）的表達，進而促進肺病的轉移,。這些機制有望成為肺病治病的潛在靶點,。雖然大多數(shù)外泌體都是促進一些病癥的侵襲與轉移，但也有報道稱,，外泌體miR-302b可以通過壓制TGFβRⅡ來壓制肺病細胞的轉移與增殖,。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物。用于外泌體提取的體液收集注意事項：抽血時間。南京外泌體提取試劑服務電話

近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入,，它的應用已經(jīng)涉及一些病癥治病領域、醫(yī)學基礎和免疫領域,、寄生蟲領域,；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,。外泌體來源及內(nèi)含物,。幾乎所有類型的細胞都可以分泌外泌體，同時外泌體也普遍存在于體液中,，包括血液,、眼淚、尿液,、唾液,、乳汁、腹水等,。目前研究發(fā)現(xiàn)外泌體中富含核酸（microRNA,、lncRNA、circRNA,、mRNA,、tRNA等）、蛋白,、膽固醇等,。外泌體的表面marker主要有CD63、CD81,、CD9,、TSG101、HSP27等,。外泌體鑒定,。目前對于外泌體的鑒定主要有四種方法：透射電子顯微鏡（TEM）、Nanosight,、WesternBlot,、流式細胞術。珠海外泌體提取試劑推薦廠家外泌體提?。撼叽缗抛枭V可以精確分離大小分子,。

外泌體的提取分離：1、超速離心法（差速離心）,。超離法是常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進行（如圖所示），可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時,，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉子類型有關）,，純度也受到質疑；此外,，重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質量。2,、密度梯度離心,。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,，是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣，耗時,。

外泌體相關蛋白質與肺病的診斷：近年來眾多文獻報道,，肺病細胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質并促進肺病的發(fā)生的發(fā)展，是早期診斷肺病的有效途徑,。有研究發(fā)現(xiàn),，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%,，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%,，因而認為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標志物。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質,，進一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號傳導途徑以促進一些病癥的發(fā)生的發(fā)展,，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學標記物。近幾年來,，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多,。

1983年,，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,，且外泌體天然存在于體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細胞間通訊,，對外泌體的研究興趣日益增長,，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。它普遍存在并分布于各種體液中,，攜帶和傳遞重要的信號分子,。上海外泌體提取試劑哪里買

外泌體提取：回收率不穩(wěn)定（可能與轉子類型有關）,，純度也受到質疑,。南京外泌體提取試劑服務電話

外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白）,，用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高,、操作簡便,、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低,，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,，不利于下游實驗，難以普遍普及,。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,，早先應用于從血清等樣本中收集菌類，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性）,，顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,，因此發(fā)表文章時易受質疑,。如純度和回收率低,，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一,，產(chǎn)生難以去除的聚合物,。南京外泌體提取試劑服務電話

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